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目的：研究自体骨髓干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)动员联合辛伐他汀治疗脑出血的疗效和机制。
方法：选用清洁级雄性SD大鼠,建模前所有动物腹腔注射 5-溴2-脱氧尿嘧啶核苷 (Bromodeoxyuridine, Brdu) 50mg/kg/d³3 天。应用立体定位向尾状核注入自体血制备脑出血动物模型,脑出血后 24h将大鼠随机分为4组：自体BMSCs动员联合辛伐他汀治疗组、自体BMSCs动员治疗组、辛伐他汀治疗组和 PBS对照组。即 BMSCs 动员治疗组经腹腔注射 rhG-CSF (50ug/kg/d)；辛伐他汀治疗组给予口服辛伐他汀2mg/kg/d；自体BMSCs动员联合辛伐他汀组在BMSCs动员治疗组基础上给予口服辛伐他汀 2mg/kg/d；PBS 对照组给予 PBS,各组动物均连续给药7d。于术后24h、7d、14d、21d、28d采用改良神经功能缺损程度评分(modified neurological severity score, mNSS )和转角试验( cornering test )检测大鼠神经行为学变化,HE染色观察出血周围组织病理变化,电镜观察超微结构改变情况,免疫荧光双染检测 BrdU / NSE 双阳性表达细胞数,免疫组织化学检测Ⅷ因子表达情况,TUNEL检测细胞凋亡。实验数据采用均数±标准差( x±s )表示,采用SPSS 13.0软件包进行统计分析,重复测量数据采用单个重复测量因素的方差分析,各组之间比较采用多个样本均数两两比较(LSD法),P<0.05为差异有显著性意义。
结果：1. 神经行为学检查 脑出血后24小时各组mNSS评分、转角测试评分无明显统计学差异(P>0.05)。随时间的延长,各组mNSS评分逐渐下降,治疗组1w时mNSS评分下降幅度较大,向右转身次数减少,联合组最为显著。脑出血后 1w、2w、3w、4w各治疗组mNSS明显低于对照组(P<0.05)。
2. 组织病理变化 血肿、组织水肿及缺血面积1w时开始减少,其消散程度由快到慢顺序依次为：联合组,动员组,辛伐他汀组,对照组。
3. 血肿周围超微结构变化 出血后 1w,治疗组线粒体肿胀程度减轻,破坏的突触结构逐渐恢复正常,对照组仍有严重的超微结构破坏。
4. 免疫荧光 BrdU/NSE免疫荧光双染显示,脑出血后24小时血肿周围可依稀出现BrdU/NSE共表达(黄色荧光),随时间延长,双标阳性细胞逐渐增多,至2w时达高峰,随后呈递减趋势。2w时联合组免疫荧光双标阳性细胞数显著高于辛伐他汀治疗组(P<0.05)和自体BMSCs动员组P<0.05)。
5. 免疫组织化学检测 2w时联合组微血管计数显著增多,明显高于对照组(P<0.05),自体BMSCs动员组、辛伐他汀组均明显高于对照组 (P均<0.05)。
6. TUNEL 检测细胞凋亡 各组血肿周围细胞凋亡数于脑出血后 24h 达高峰,随时间延长呈逐渐下降趋势。2w时,联合组明显低于其他三组(P均<0.05),后两组均明显低于对照组 (P均<0.05)。
结论：1. 自体BMSCs动员、辛伐他汀单独应用均具有神经保护作用,促进脑出血大鼠神经功能恢复,二者联合应用起协同相加作用,效果更明显。
2. 自体BMSCs动员、辛伐他汀单独应用均减轻脑出血后病理损害,促进超微结构的恢复,二者联合应用作用更显著。
3. 自体BMSCs动员联合应用辛伐他汀增强协同促进神经再生、血管再生。
4. 自体BMSCs动员联合辛伐他汀明显抑制细胞凋亡,发挥神经保护作用,比单独治疗作用明显。
5. 自体BMSCs动员联合辛伐他汀有效达到神经再生和功能恢复的目的,为临床自体BMSCs动员联合辛伐他汀治疗脑出血提供有力的实验依据。