水稻穗腐病镰刀菌及相关毒素研究

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近年来,全国各稻区普遍发生一种危害稻穗和谷粒的病害—水稻穗腐病(Rice spikelet rot disease, RSRD)。该病由多种真菌引起,造成稻米腐坏、变色、畸形,致使结实率降低或不实,严重影响产量。还由于病原菌产生色素和毒素而改变稻谷外观,降低稻米品质。作者采集了浙江省杭州市和嘉兴市两地的水稻穗腐病样本,共鉴定出5种病原镰刀菌,并对各种镰刀菌的生物学特性、脂肪酸组成和含量、致病力、产毒条件和产毒能力、粗毒素毒性、田间防治进行了研究。获得主要研究结果如下:1.水稻穗腐病镰刀菌的分离和鉴定。共分离到216株镰刀菌,利用培养性状、形态特征观察和分子生物学手段共鉴定到5个镰刀菌种,包括:层出镰刀菌(Fproliferatum)、藤仓镰刀菌(F.fujikuroi)、拟轮枝镰刀菌(F. verticillioidess)、尖孢镰刀菌(F. oxysporum)和禾谷镰刀菌(F. graminearum)。其中,层出镰刀菌(F.proliferatum)137株,占63.4%;藤仓镰刀菌(F.fujikuroi)50株,占23.1%;拟轮枝镰刀菌(F. verticillioidess)21株,占9.7%;尖孢镰刀菌(F. oxysporum)5株占2.3%;禾谷镰刀菌(F. graminearum)3株,占1.4%。通过Koch法则验证,各种镰刀菌均能成功接种稻穗,使稻穗感染穗腐病。2.病原镰刀菌生物学特性。禾谷镰刀菌菌最适生长温度是25℃,最适pH为6,最佳碳源是葡萄糖、蔗糖,最佳氮源是尿素、硝酸钠;尖孢镰刀菌最适生长温度是25℃,最适pH为6,最佳碳源是葡萄糖、蔗糖,最佳氮源是硝酸钠;层出镰刀菌最适生长温度是25℃,最适pH为6,最佳碳源是蔗糖、葡萄糖,最佳氮源是硝酸钠、亚硝酸钠;藤仓镰刀菌最适生长温度是25℃,最适pH为8,最佳碳源是葡萄糖,最佳氮源是硝酸钠;拟轮枝镰刀菌最适生长温度是25℃,最适pH为8,最佳碳源是蔗糖、葡糖糖、果糖,最佳氮源是硝酸钠、尿素。3.病原镰刀菌脂肪酸分析。应用Sherlock脂肪酸鉴定系统,总共检测出36种脂肪酸。Sum In Feature3、16:00、Sum In Feature5、18:1w9c和18:00为主要脂肪酸。5种镰刀菌的脂肪酸组成及含量有一定的差异性,但不显著。因此,无法利用脂肪酸组成特征十分准确的将不同镰刀菌进行分类。4.病原镰刀菌致病力。通过病原菌孢子悬浮液接种水稻穗部试验,证明藤仓镰刀菌的致病力最强,拟轮枝镰刀菌、层出镰刀菌、禾谷镰刀菌次之,尖孢镰刀菌最弱。5.病原镰刀菌产毒能力和粗毒素毒性。禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌和层出镰刀菌的最佳产毒培养基为Richard培养基,最佳产毒温度为25℃,最佳产毒pH为6,最佳产毒培养时间为15天;藤仓镰刀菌和拟轮枝镰刀菌的最佳产毒培养基为Richard和PD培养基,最佳产毒温度为25℃,最佳产毒pH为8,最佳产毒培养时间为15天。利用活性炭吸附法提取了各种镰刀菌的粗毒素,并测试了粗毒素的毒性。藤仓镰刀菌粗毒素对水稻的毒害作用最强,尖孢镰刀菌最弱。利用ELLISA技术测定了粗毒素中伏马菌素(fumonisin)的含量。其中,藤仓镰刀菌粗毒素中伏马菌素含量最高,为5379.03ppm;拟轮枝镰刀菌次之,含量为638.62ppm;之后是禾谷镰刀菌禾谷镰刀菌,含量为139.39ppm;层出镰刀菌含量为13.87ppm;最后是尖孢镰刀菌,含量仅为2.16ppm。6.水稻穗腐病田间防治。用20%异噻菌胺悬浮剂(200g a.i./ha)在分蘖盛期和孕穗末期各喷雾1次的防治效果最好,达到45.06%。25%咪鲜胺乳油+15%三唑酮乳油(112.25+90g a.i./ha)孕穗末期和齐穗期各喷雾1次的防治效果并不理想,防效只有27.99%;25%咪鲜胺乳油+50%多菌灵可湿性粉剂(112.5+450g a.i./ha)孕穗末期和齐穗期各喷雾1次的防治效果最差,防效仅有0.08%。
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