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目的食管鳞癌是一种恶性肿瘤,缺乏明确的药物分子靶点。Hsp90作为一种分子伴侣,在多种癌症中过表达,是预后不良的标志物。研究表明,Met、Akt在食管鳞癌中高表达且是关键的Hsp90客户蛋白,可诱导肿瘤细胞的生长和增殖。当前,第二代Hsp90抑制剂STA9090广泛应用于多种人类恶性肿瘤,有相当大的前景。然而STA9090对食管鳞癌活性及具体的分子机制尚未得到完全验证,因此我们以食管鳞癌为研究对象,探讨Hsp90抑制剂STA9090抗食管鳞癌作用及分子机制。方法一、Hsp90在食管癌中的表达情况1.利用GEPIA数据库分析Hsp90在食管癌组织中的表达水平及其与患者预后的关系。2.Western blot检测Hsp90在正常食管上皮细胞和不同食管鳞癌细胞中的表达。二、Hsp90抑制剂STA9090对食管鳞癌细胞的药理学作用1.MTT、克隆形成、伤口愈合实验、流式细胞术等方法探讨Hsp90抑制剂STA9090对食管鳞癌细胞增殖、克隆形成、迁移、细胞周期分布以及凋亡的影响。2.Western blot检测Hsp90抑制剂STA9090对食管鳞癌细胞中Cleaved-PARP、促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响。三、Hsp90抑制剂STA9090抗食管鳞癌的分子机制1.食管癌中Hsp90与Met、Akt相关性分析。GEPIA数据库分析食管癌组织中Hsp90与Met、Akt的相关性,Western blot检测不同食管鳞癌细胞中Hsp90、Met、Akt蛋白的表达。2.Hsp90抑制剂STA9090对Met/Akt通路的影响。用不同浓度STA9090（50 n M、100 n M、500 n M）处理食管鳞癌KYSE70、TE-1细胞24 h,Western blot检测STA9090对Met/Akt通路蛋白表达的影响;环几酰亚胺（CHX）单用或与STA9090联用分别处理KYSE70和TE-1细胞0 h、4 h、8 h、12 h、24 h,Western blot检测Met、Akt蛋白表达的变化;STA9090单用或与蛋白酶体抑制剂MG132联用处理KYSE70和TE-1细胞24 h,Western blot检测Met、Akt蛋白的表达。3.Met对食管鳞癌细胞的作用。用Met抑制剂INC280或Met si RNA抑制食管鳞癌细胞中Met表达,MTT、流式细胞术、Western blot及伤口愈合实验等方法检测细胞增殖、凋亡及迁移情况,并用Western blot检测Akt通路蛋白表达情况。结果一、Hsp90在食管癌中高表达1.GEPIA分析提示,与正常食管上皮组织相比,Hsp90在食管癌组织中的m RNA水平显著升高,且Hsp90高表达患者的生存期低于低表达患者。2.不同食管鳞癌细胞中Hsp90表达不同。且与正常食管上皮细胞相比,Hsp90蛋白在食管鳞癌细胞中的表达显著上调。二、Hsp90抑制剂STA9090抑制食管鳞癌细胞活力1.Hsp90抑制剂STA9090显著抑制食管鳞癌细胞增殖、克隆形成和迁移,引起G2/M期阻滞并诱导凋亡。2.Hsp90抑制剂STA9090促进食管鳞癌细胞中Cleaved-PARP和促凋亡Bax蛋白的表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。三、Hsp90抑制剂STA9090通过降解Met、Akt蛋白抑制Met/Akt通路,发挥抗食管鳞癌作用1.食管癌中Hsp90与Met、Akt呈正相关。GEPIA分析和Western blot结果显示,食管癌组织和细胞中Hsp90与Met、Akt表达呈显著正相关。2.Hsp90抑制剂STA9090通过降解Met、Akt蛋白抑制Met/Akt通路。STA9090以浓度依赖的方式抑制Met、p-Met、Akt、p-Akt的表达,提示STA9090可能使Met、Akt蛋白降解。环己酰亚胺追踪实验证实,STA9090能够诱导Met、Akt蛋白降解,而蛋白酶体抑制剂MG132能够逆转STA9090对Met、Akt蛋白的降解,表明STA9090能够通过蛋白酶体降解Met、Akt蛋白。3.Met抑制剂INC280和Met si RNA抑制Met能够抑制食管鳞癌细胞增殖、迁移和Akt通路蛋白的表达,提示Met激活具有促食管鳞癌作用。结论Hsp90抑制剂STA9090具有抗食管鳞癌作用,分子机制与其降解客户蛋白Met、Akt有关。