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目的:DNA甲基化是表观遗传学分子机制之一,在结直肠癌的发生、发展过程中起着重要的作用。肿瘤抑制基因启动子区域CpG岛高甲基化导致其转录沉默目前被认为是肿瘤发生的一个共同特征,由于DNA甲基化与经典遗传学改变不同,具有可逆性的特点,因此可以通过应用DNA甲基转移酶抑制剂逆转DNA甲基化的过程,使沉默的肿瘤抑制基因重新被激活,从而发挥抑制肿瘤生长的作用,这对于肿瘤的治疗来说是十分有意义的。地西他滨在几种核苷类抑制剂中具有最强去甲基化作用,并被用于初治及难治复发性骨髓增生异常综合征等恶性血液病患者的治疗,但由于常导致患者出现严重胃肠道反应和表现出骨髓毒性而限制了其广泛的临床应用。盐酸普鲁卡因（procaine hydrochloride,PCA）作为临床常用的局部麻醉药物,近年来也被发现是一种DNA去甲基化剂,在人乳腺癌MCF-7细胞、胃癌SGC-7901细胞中具有生长抑制作用。然而,盐酸普鲁卡因对结肠癌细胞DNA甲基化的调节以及生物学功能的影响鲜见报道。本课题组以人结肠癌DLD-1、HCT116细胞为模型,分析盐酸普鲁卡因处理对肿瘤抑制基因Septin9甲基化状态和表达水平的影响,探讨盐酸普鲁卡因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制,为盐酸普鲁卡因应用于结直肠癌的临床治疗提供理论基础及实验依据。方法:（1）不同浓度（1.0、1.5、2.0和2.5mmol/L）的盐酸普鲁卡因作用于结肠癌DLD-1、HCT116细胞24、48和72小时,MTS检测盐酸普鲁卡因对结肠癌DLD-1、HCT116细胞的增殖抑制作用。（2）通过倒置显微镜观察盐酸普鲁卡因处理前后结肠癌DLD-1、HCT116细胞形态学改变。（3）通过流式细胞术检测盐酸普鲁卡因对结肠癌DLD-1、HCT116细胞凋亡和细胞周期的影响。（4）通过Transwell实验检测盐酸普鲁卡因对结肠癌DLD-1、HCT116细胞迁移能力的影响。（5）通过亚硫酸氢钠测序法（bisulfite genomic sequencing,BGS）,在盐酸普鲁卡因作用于结肠癌DLD-1、HCT116细胞前后,检测Septin9基因的甲基化状态。（6）通过实时荧光定量聚合酶链式反应（realtime PCR,RT-PCR）检测盐酸普鲁卡因处理结肠癌DLD-1、HCT116细胞前后,Septin9基因mRNA的表达水平。结果:（1）盐酸普鲁卡因能够抑制结肠癌DLD-1、HCT116细胞的增殖,并且对其生长抑制具有浓度依赖效应和时间依赖效应。（2）盐酸普鲁卡因处理后,DLD-1细胞体积缩小,生长密度降低;HCT116细胞皱缩成团,出现空泡现象并从它们生长的表面回缩。（3）与空白对照组相比,盐酸普鲁卡因处理后可以显著诱导DLD-1、HCT116细胞的凋亡,并且将DLD-1、HCT116细胞的生长阻滞于G2/M期,比较差异均有统计学意义（P<0.05）。（4）Transwell实验显示,盐酸普鲁卡因处理后,DLD-1、HCT116细胞的跨膜细胞数明显低于空白对照组,比较差异均有统计学意义（P<0.05）。（5）盐酸普鲁卡因作用于DLD-1、HCT116细胞后,Septin9基因启动子区域CpG岛甲基化程度下降,而Septin9基因mRNA表达水平明显上升,处理前后比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:盐酸普鲁卡因能够通过使Septin9基因去甲基化,上调Septin9 mRNA的表达水平,从而抑制结肠癌DLD-1、HCT116细胞的增殖。这提示盐酸普鲁卡因有望成为基于表观遗传学的结直肠癌治疗的安全候选药物。