蜱是一类专性吸血的体外寄生虫,隶属于节肢动物门(Arthropoda)、蛛形纲(Arachnida)、蜱螨亚纲(Acarina)、寄螨目(Parasitiformes)。全世界已发现3科20属共907种,中国已发现并报道2科10属125种。本课题的研究对象长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)隶属于硬蜱科(Ixodidae),血蜱属(Haemaphysalis),广泛分布于亚洲东部和澳洲。该物种是我国的主要蜱种之一,可以传播多种疾病,对人类、家畜以及野生动物的危害极大,对其研究具有非常重要的意义。雌蜱吸血量巨大,繁殖能力极强,对宿主造成的危害极大。卵巢作为雌蜱生殖系统的重要组成部分,在生殖过程中起着重要的作用,因此对卵巢生理和发育的研究一直都是热点。研究蜱类卵巢发育的调控机制,对于有效控制蜱类种群数量,减少蜱类危害等方面具有非常重要的意义。本研究以饱血后的长角血蜱雌蜱为研究对象,对长角血蜱饱血后各个时期的卵巢进行定量蛋白质组学及磷酸化修饰蛋白质组学研究,以期找到控制卵巢发育的关键因子,为进一步深入了解其分子调控机制奠定基础。实验共分为两部分:第一部分,运用数据非依赖性采集DIA定量蛋白质组学技术研究长角血蜱饱血后卵巢发育过程中5个时间点全部蛋白质的动态变化。本研究共进行4次重复实验,共鉴定到1170个蛋白,对其中具有显著差异表达的555个蛋白进行生物信息学分析,发现了大量可能参与卵黄蛋白降解以及细胞增殖的蛋白,对其中一些蛋白开展了RNA干扰实验,结果发现亮氨酸氨基肽酶、蛋白激酶B这两种蛋白被干扰后,雌蜱卵巢的发育速度明显变缓。亮氨酸氨基肽酶可调节细胞内的氨基酸代谢,是机体生长发育过程中的关键蛋白之一,并且该蛋白也参与卵黄蛋白的合成。由于卵黄蛋白是在卵黄发生期合成的,为着重了解亮氨酸氨基肽酶在卵黄蛋白合成时所发挥的作用,所以对饱血后的雌蜱进行RNAi,当亮氨酸氨基肽酶被knock down后,雌蜱的卵巢发育速度变缓,产卵量减少30%。蛋白激酶B可参与调控细胞存活、生长、增殖等生物过程,为了解蛋白激酶B在蜱整个卵巢发育时期的作用,因此对饥饿雌蜱进行RNA干扰实验,当该基因被knock down后,雌蜱饱血体重降低60%,卵巢发育明显变缓,产卵量降低78%。第二部分,对饱血雌蜱卵巢不同发育时间点开展磷酸化蛋白质组学研究。通过DIA定量蛋白质组学技术鉴定到840个磷酸化肽段,涉及454个磷酸化蛋白,对其中具有显著差异表达的782个磷酸化肽段所对应的404个磷酸化蛋白进行生物信息学分析,发现多种调节生长发育的蛋白,通过大量RNA干扰实验,发现蛋白Yorkie在饥饿雌蜱中被干扰后,使其饱血体重减少70%,卵巢发育受到明显抑制,产卵量锐减。Yorkie是一种转录共激活因子,该蛋白能够同与DNA结合的转录因子结合,并激活下游靶基因的转录,这些受调控的下游靶基因主要参与细胞的增殖,生长并抑制凋亡的发生,从而介导Yki诱导的组织生长。总之,本论文利用DIA定量蛋白质组学技术,系统研究了饱血雌蜱卵巢发育过程中蛋白质及其磷酸化修饰的动态变化。通过分析定量蛋白质组学结果,最终发现了能够控制蜱类卵巢发育以及机体细胞生长,增殖的关键蛋白,研究结果填补了该领域的研究空白,并能够为蜱类的防治提供一定的理论依据,具有重要的理论和实际意义。