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随着人们对健康的不断追求,最近些年来益生菌在食品领域(特别是其在宿主肠道中的调控研究)的研究越来越受重视。益生菌是一类活体微生物或其产物,通过向宿主补给这类活体微生物或其产物后,它们往往会对宿主肠道菌群进行有益修饰和平衡。在水产领域,众多研究表明,益生菌可以更好的解决抗生素滥用所遗留的一系列难题,并逐步成为了抗生素的替代品。但是,乳酸菌和蛭弧菌类(Bdellovibrio and Like Organisms,BALOs)在冷水性养殖大菱鲆(Scophthatmus maximus)和皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)养殖体系(特别是在产业水平)中的调控作用还有待探索。本研究从水产养殖产业的层面设计试验,采用不同的益生菌拌食喂养方式,通过高通量测序技术和DGGE技术研究了乳酸菌和BALOs对冷水性养殖大菱鲆和皱纹盘鲍养殖水体和肠道菌群结构的作用等。论文主要研究内容和结果如下:1、实验采用变性梯度凝胶电泳技术(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)研究了BALOs菌株BDW03泼洒水体喂食幼苗种苗大菱鲆60 d后,BALOs菌株BDW03对大菱鲆养殖水体菌群结构的影响。并研究了BDW03对幼苗大菱鲆养殖水质、养殖水体和肠道中可培养总菌(TCBC)以及可培养总弧菌(TCVC)、存活率等的影响。结果表明:BDW03对试验组中主要水质参数无显著性影响(P>0.05);和对照组相比,BDW03显著降低(P<0.05)了试验组大菱鲆水体和肠道中TCBC和TCVC浓度;实验60 d后,BDW03显著提高(P<0.05)了大菱鲆存活率、体长获得率、体重获得率等;养殖水体DGGE结果表明,BDW03简化了大菱鲆养殖水体菌群,消失的DGGE条带中,经测序证实有两个条带为弧菌属,其他均为不可培养细菌。2、研究采用高通量测序技术探讨了BALOs菌株BDW03泼洒水体喂食种苗大菱鲆60 d后,BALOs菌株BDW03对大菱鲆肠道菌群结构的影响。并研究了BALOs菌株BDW03对幼苗大菱鲆养殖水质、养殖水体和肠道中TCBC以及TCVC、存活率、生长表现等的影响。研究结果表明,BDW03对大菱鲆养殖水质影响不显著(P>0.05);BDW03对大菱鲆养殖水体和肠道中的TCBC和TCVC的影响差异显著(P<0.05);再者,高通量测序结果进一步表明:BDW03降低了试验组大菱鲆肠道菌群中的Shannon指数、ACE指数和Chao1指数;BDW03对试验组大菱鲆肠道没有控制作用的菌属为8个(占53.3%),这8个菌属中多为革兰氏阳性菌属(6/8);而BAlOs菌株BDW03对试验组大菱鲆肠道菌属有控制作用的菌属为7个,占总菌属的46.6%,这7个菌属中26.7%为革兰氏阴性菌,20.0%为革兰氏阳性菌;60d时,除对试验组中大菱鲆体长获得率影响不显著(p>0.05)外,bdw03对试验组中大菱鲆的存活率、最后体长、最后体重、体重获得率和每天体重获得(adwg)影响均显著(p<0.05)。3、为观察balos菌株是否对其它冷水养殖种类也有类似的作用,实验采用dgge技术验证性研究了balos以泼洒水体喂食种苗皱纹盘鲍90d后,balos在其它冷水养殖中对皱纹盘鲍内脏菌群结构的影响。并研究了balos对皱纹盘鲍养殖水体主要水质、水体和内脏中tcbc以及tcvc、存活率等的影响。结果表明,balos对试验组水质无显著影响(p>0.05),但是显著降低(p<0.05)了试验组皱纹盘鲍养殖水体和内脏中tcbc和tcvc;90d时,和对照组相比,balos对试验组皱纹盘鲍的存活率、皱纹盘鲍体长获得率、体重获得率和adwg影响显著(p<0.05)。皮尔森相关性(pearsoncorrelation)分析表明,试验组中皱纹盘鲍最后体重和最后体长均与皱纹盘鲍水体和内脏中tcvc和tcbc呈负相关,且相关性显著(p<0.05)。皱纹盘鲍内脏dgge分析进一步表明:试验组中,消失或无法检测到的dgge条带占总条带的22.22%(6/27)。进一步dgge测序结果表明,消失或无法检测的dgge条带中,有两个条带为弧菌(v.halioticoliandv.tapeti),其它分别为:serratiasp.、alteromonassp.、sphingomonassp.和psychrobacterfozii。4、实验从广州市售随机泡菜样品中分离出多株乳酸菌菌株。对其溶血性、产生物胺(组胺,酪胺和苯乙胺)特性、抗菌活性(39株不同来源致病菌)、耐酸性、耐胆汁盐特性、β-半乳糖苷酶活性、抗生素耐药性等进行了研究。结果表明:14株乳酸菌在血平板(羊血)上均不溶血(γ-溶血);且均不产组胺,酪胺和苯乙胺;对39株不同来源致病菌有着不同的抗菌活性,其中,p1、p2和p11抑菌谱较广,抗菌活性较强,分别对34株、33株和33株具有抗菌活性。再者,对致病菌达到最强抑菌效果株数最多的乳酸菌为p2,它对13株致病菌达到了最强抑菌效果(为“+++”,抗菌直径>15mm)。经过以上筛选后,实验对p1、p2和p11特性进行了深入分析。耐酸和耐胆盐实验表明:p2在ph2.5条件下能正常生长,其它两株却不能耐受这些酸度酸度;p2和p11在0.5%、1.0%和1.5%胆汁盐浓度下表现出较强的耐受性。就β-半乳糖苷酶活性而言,实验结果表明,p2的β-半乳糖苷酶活性最强,p11次之,p1最弱;抗生素耐药性表现上,p2对测试的6种常见抗生素(氯霉素、红霉素、环丙沙星、头孢噻吩、四环素和庆大霉素)均没有耐药性,为100%敏感,然后依次是p11和p1,分别为67%和50%敏感。p216srdna分子测序结果通过rdpclassifier和ncbiblast分析表明,p2为唾液乳杆菌。5、研究采用高通量测序技术探讨了乳酸菌菌株P2以拌食饵料喂食种苗大菱鲆60 d后,乳酸菌菌株P2对种苗大菱鲆肠道菌群结构的影响。并研究了其对大菱鲆养殖水质、肠道和水体中TCBC与TCVC、存活率、生长表现等的影响。研究结果表明,P2对其养殖水质无显著性影响(P>0.05);和对照组相比,P2对试验组大菱鲆养殖水体中TCBC和TCVC影响不显著(P>0.05),但P2对试验组大菱鲆肠道中TCBC和TCVC影响显著(P<0.05);除对试验组大菱鲆体长获得率影响不显著(P>0.05)外,P2对试验组大菱鲆存活率、最后体长、最后体重、体重获得率和ADWG影响均显著(P<0.05);大菱鲆肠道高通量测序结果表明:P2降低了试验组大菱鲆肠道菌群的Shannon指数、ACE指数和Chao1指数;同时,P2对大菱鲆肠道中60.0%(9/15)菌属具有较好的控制作用,在这些具有较好控制作用的菌属中,33.3%的菌属为革兰氏阴性菌,26.7%的菌属为革兰氏阳性菌。6、BALOs和乳酸菌的研究比较发现:通过乳酸菌拌食饵料和泼洒BALOs喂食大菱鲆60 d后,乳酸菌和BALOs对大菱鲆肠道菌群中革兰氏阴性菌的控制作用(分别占总菌属的33.3%和26.7%)优于对革兰氏阳性菌的控制作用(分别占总菌属的(26.7%和20.0%)。乳酸菌和BALOs均显著提高了大菱鲆存活率、最后体重、最后体长、体重获得率和ADWG(P<0.05),BALOs的这些结果也在冷水性养殖的皱纹盘鲍中得到验证。不同的是:乳酸菌菌株P2在大菱鲆肠道中的定殖能力优于BALOs菌株,并且乳酸菌增加了大菱鲆肠道中未分类菌门的菌群丰度。