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当前，美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（NA-type PRRSV）已经在我国广泛流行，但近年来的数据分析表明，欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（EU-typePRRSV）也已经传入我国，且有证据表明两种基因型不同毒株之间可以发生内部重组。因此，根据当前形势，我国不仅要考虑美洲型PRRSV的预防，同时又要加强欧洲型PRRSV的防控。另外，临床上PRRSV与2型猪圆环病毒（PCV2）混合感染十分普遍，现已证明PCV2和PRRSV均能感染单核细胞系细胞，PRRSV可增强PCV2的复制能力，使血液中PCV2含量的增加，增强IL-10的表达量，抑制了T细胞的免疫反应，导致PCV2逃避宿主的免疫应答。目前商业化的疫苗尚不能有效的防治PRRSV和PCV2的混合感染。本实验以美洲型PRRSV CC株的ORF3、ORF5基因，欧洲型代表株LV株ORF3、ORF5基因及PCV2ORF2基因为基础，构建了欧洲型PRRSV重组核酸苗（pVAX1-EU-ORF3-ORF5）、欧洲型PRRSV和美洲型PRRSV二价重组核酸苗（pVAX1-NA-ORF3-ORF5-EU-ORF3-ORF5）、欧洲型PRRSV和PCV2二联重组核酸苗（pVAX1-ORF2-EU-ORF3-ORF5），同时利用同源重组的理论和技术，以痘苗病毒天坛株（E3L）作为改造对象，构建TK基因缺失型天坛株痘苗病毒减毒疫苗，成功构建了欧洲型PRRSV重组痘苗病毒（rVV-EU-ORF3-ORF5）、欧洲型PRRSV和美洲型PRRSV二价重组痘苗病毒（rVV-NA-ORF3-ORF5-EU-ORF3-ORF5）、欧洲型PRRSV和PCV2二联重组痘苗病毒（rVV-ORF2-EU-ORF3-ORF5）。利用筛选标记对重组痘病毒进行筛选、鉴定，最后通过小鼠和猪体动物实验，分析其免疫特性，检测这些疫苗诱导动物机体产生的特异性体液和细胞免疫应答能力，筛选出具有良好应用前景的治疗性疫苗，并建立有效的免疫策略。结果得出所构建的核酸疫苗和重组痘病毒疫苗具有良好免疫原性和反应原性，能诱导小鼠和猪体特异性体液和细胞免疫应答，猪体用PRRSV（LV株和NM12株）和PCV2攻毒后能够提供有效的免疫保护。另外证明prime-boost疫苗免疫策略可以增强体液和细胞免疫应答，尤其是用重组痘病毒疫苗rVV-EU-ORF3-ORF5首次免疫，DNA疫苗（pVAX1-EU-ORF3-ORF5）加强免疫的方法可以更好的抵抗PRRSV的感染，并能在体内抑制病毒的复制。最后，通过实验动物表明选择适宜的佐剂和合适DNA递送系统可以增强prime-boost的免疫反应。QuilA疫苗佐剂在PRRSV疫苗产生的免疫反应和保护效率方面具有良好的前景，DNA疫苗用壳聚糖包裹，以DNA-壳聚糖纳米粒的递送方式进行免疫可能是个很好的选择。总之，未来的PRRSV和PCV2疫苗在抵抗病毒感染方面必须更安全，更有效，更有潜力。