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目的:探索孕期炭黑纳米颗粒(Carbon black nanoparticles-Printex90,Pr-CBNPs)暴露对博来霉素(Bleomycin,BLM)诱发的子代小鼠肺纤维化的影响及其分子机制。方法:将36只C57/BL6J小鼠按雌雄比例2:1合笼,每日观察阴栓。孕鼠单独饲养,记为妊娠第1天(Gestational day 1,GD1)。选取16只孕鼠,随机分为孕鼠对照组(Mock,Pr-M)与孕鼠炭黑组(Pr-CBNPs),每组8只,于GD9-18天通过鼻内分别给与无菌超纯水和Pr-CBNPs(515μg/动物),构建孕期暴露Pr-CBNPs动物模型。分娩49天(Parturition day 49,PD49)后Pr-M组与Pr-CBNPs组各选取16只雄性子代,分别随机分组,记为Pr-M组,Pr-CBNPs组,Pr-M+BLM组,Pr-CBNPs+BLM组,每组8只,分别气管内给予Pr-M组与Pr-CBNPs组无菌生理盐水25μL,Pr-M+BLM组与Pr-CBNPs+BLM组2.5 U/kg溶于25μL无菌生理盐水的BLM。BLM给药后第14天处死小鼠,获取肺组织。肺组织石蜡切片分别做H&E染色、Masson三色染色、免疫组织化学染色(α-SMA、COL1A1);肺组织Western-blotting(WB)检测肺纤维化相关指标(Fn1、COL1A1);进一步通过WB检测自噬相关指标(LC3-B、p-AMPK、p-ULK1、p-mTOR、LKB1),使用试剂盒检测肺组织ATP含量,探索相关分子机制。结果:H&E染色结果提示,BLM可导致小鼠肺泡隔出现水肿、增厚,且Pr-CBNPs+BLM组相较于Pr-M+BLM组损伤更严重。Masson三色染色结果提示,BLM可导致小鼠肺组织出现大量胶原沉积,且Pr-CBNPs+BLM组相较于Pr-M+BLM组胶原沉积更多。免疫组织化学结果提示,BLM可导致小鼠肺组织α-SMA与COL1A1出现累积,且Pr-CBNPs+BLM组相较于Pr-M+BLM组累积更多。WB检测肺纤维化相关指标提示,BLM可导致小鼠肺组织Fn1、COL1A1表达增加,且Pr-CBNPs+BLM组相较于Pr-M+BLM组增加更多,差异有统计学意义(P<0.05)。WB检测自噬相关指标提示,BLM处理可致自噬程度升高,但Pr-CBNPs+BLM相较于Pr-M+BLM组自噬激活降低,差异有统计学意义(P<0.05)。WB检测结果提示,BLM可显著激活自噬关键调控蛋白p-AMPK的表达,但Pr-CBNPs+BLM组相较于Pr-M+BLM组的激活程度显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);而p-mTOR的表达在各组中无差异。进一步WB检测结果提示,BLM可显著激活AMPK上游激活因子LKB1及下游p-ULK1的表达,但Pr-CBNPs+BLM组相较于Pr-M+BLM组的激活程度显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。肺组织ATP含量测定测定结果显示,BLM引起肺组织ATP含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:综合H&E染色、Masson三色染色、免疫组织化学染色、肺组织WB结果表明,孕期炭黑纳米颗粒暴露可加重博来霉素诱发的子代小鼠肺纤维化程度,导致该现象的可能机制是Pr-CBNPs破坏了LKB1-AMPK-ULK1轴介导的自噬激活。