siRNA沉默Survivin基因对鼻咽癌CNE-2细胞凋亡的影响

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目的合成Survivin小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列,用于转染人未分化型鼻咽癌细胞株CNE-2,体外检测Survivin siRNA转染CNE-2细胞后,Survivin mRNA和蛋白的表达情况,筛选高效的siRNA转染CNE-2细胞,并检测CNE-2细胞凋亡情况。方法根据gene bank的Survivin的序列,设计合成3段针对Survivin mRNA的siRNA,用siRNA转染鼻咽癌CNE-2细胞株,设置空白对照组和阴性对照组,通过RT-qPCR检测CNE-2细胞的Survivin mRNA,用2-△△Ct法计算mRNA相对表达量。Western blot检测Survivin蛋白表达,流式细胞术及TUNEL法凋亡检测转染siRNA后CNE-2细胞的凋亡情况。结果各组siRNA转染CNE-2细胞后,分别与对照组Survivin的mRNA相对表达量相比,转染siRNA1、2、3序列组的Survivin mRNA相对表达量分别为0.320±0.061(p<0.01),0.697±0.136(p<0.05),0.517±0.013(p<0.01),差异有统计学意义。与转染无义序列组相比,转染siRNA1组和siRNA3组mRNA表达抑制率分别为(68.46±7.94)%、(49.44±3.78)%,siRNA2 组结果无统计学意义(p>0.05)。蛋白相对表达量只有转染siRNA1组降低,其表达抑制率为(30.61±2.47)%。流式细胞术检测转染siRNA1、无义序列的CNE-2细胞和未转染细胞的细胞凋亡率,各组细胞凋亡率分别为26.14%、10.65%、0%,siRNA1转染组比转染无义序列组的细胞凋亡率提高了 15.49%。TUNEL法检测转染后CNE-2细胞,转染siRNA1组大部分细胞核呈棕色,转染无义序列和未转染细胞核呈蓝色,凋亡比例增高。结论设计的siRNA能有效降低Survivin mRNA和蛋白的表达,沉默Survivin基因后,能有效诱导CNE-2细胞凋亡。本研究为Survivin基因可能作为治疗鼻咽癌的一个靶点,为Survivin基因沉默可能是治疗鼻咽癌高效的途径提供体外实验支持。
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