【摘 要】
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目的:研究发现ROCK信号通路参与血管系统的多种病理、生理功能,其作用机制尚不清楚。本文就ROCK信号通路对高糖介导的血管平滑肌细胞炎症反应的作用及其与Nur77的关系进行探讨,为预防及治疗动脉粥样硬化提供新的靶点和研究方向。方法:1.提取培养健康雄性SD大鼠（120-150g）主动脉血管平滑肌细胞,待细胞生长至70%-80%融合后换用无血清培养液饥饿培养24h,使细胞处于静止期。2.将实验分成四
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目的:研究发现ROCK信号通路参与血管系统的多种病理、生理功能,其作用机制尚不清楚。本文就ROCK信号通路对高糖介导的血管平滑肌细胞炎症反应的作用及其与Nur77的关系进行探讨,为预防及治疗动脉粥样硬化提供新的靶点和研究方向。方法:1.提取培养健康雄性SD大鼠（120-150g）主动脉血管平滑肌细胞,待细胞生长至70%-80%融合后换用无血清培养液饥饿培养24h,使细胞处于静止期。2.将实验分成四组,即:对照组、高糖组、高糖+法舒地尔组、法舒地尔组,对照组、高糖组葡萄糖浓度分别为（5.5mmol/L,30mmol/L）,法舒地尔的剂量为50umol/L。孵育12h。收集细胞。应用Western blot检测ROCK1、ROCK2、IL-1β、IL-6蛋白表达。免疫荧光染色检测TNF-α表达情况。再应用PCR检测Nur77 mRNA水平,Western blot检测Nur77蛋白表达。3.加Cytosporone B（Csn B）:将实验分成两组,即:对照组、Csn B组,提前12h加Csn B,Csn B剂量为10μg/m L。孵育12h。收集细胞。应用PCR检测Nur77 mRNA水平,Western blot检测Nur77蛋白表达。更换培养基,加入葡萄糖,使葡萄糖浓度为30mmol/L,即分组为:高糖组、高糖+Nur77组,孵育12h。收集细胞。应用Western blot检测Nur77、IL-1β、IL-6蛋白表达。结果:1.Western blot检测结果示:与对照组相比,高糖组ROCK1、IL-1β、IL-6、Nur77蛋白表达水平均升高（P＜0.05）,ROCK2蛋白表达水平有升高趋势（P＞0.05）。加入ROCK抑制剂法舒地尔后,与高糖组相比,高糖+法舒地尔组ROCK1、IL-1β、IL-6、Nur77蛋白表达水平均降低（P＜0.05）,ROCK2蛋白表达水平有降低趋势（P＞0.05）;与对照组相比,法舒地尔组ROCK1、ROCK2、IL-1β、IL-6、Nur77蛋白表达水平均未见明显降低（P＞0.05）。2.PCR检测结果示:与对照组相比,高糖组Nur77 mRNA表达水平升高（P＜0.05）。加入ROCK抑制剂法舒地尔后,与高糖组相比,高糖+法舒地尔组Nur77 mRNA表达水平降低（P＜0.05）;与对照组相比,法舒地尔组Nur77 mRNA表达水平未见明显降低（P＞0.05）。3.免疫荧光染色检测结果示:与对照组相比,高糖组TNF-α表达增强。加入ROCK抑制剂法舒地尔后,与高糖组相比,高糖+法舒地尔组TNF-α表达降低;与对照组相比,法舒地尔组TNF-α表达未见明显降低。4.加入Csn B后,PCR及Western blot检测结果示:与对照组相比,Csn B组Nur77 mRNA水平及蛋白表达水平均升高（P均＜0.05）。更换培养基,加入葡萄糖后,与高糖组相比,高糖+Nur77组Nur77蛋白表达水平升高（P＜0.05）;IL-1β、IL-6蛋白表达水平均降低（P＜0.05）。结论:1.高浓度葡萄糖可引起血管平滑肌细胞炎症反应。2.抑制ROCK信号通路对血管平滑肌细胞炎症具有拮抗作用。3.抑制ROCK信号通路对血管平滑肌细胞抗炎作用机制可能与上调Nur77表达有关。
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