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目的:呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV))是引起婴幼儿和免疫力低下人群下呼吸道感染的主要病原体,也是诱发过敏性哮喘发生发展的重要原因。近期研究发现,2型固有淋巴细胞(Group 2 innate lymphoid cells,ILC2s)不仅可以分泌IL-4、IL-5、IL-9、IL-13等Th2型细胞因子介导哮喘患者的气道炎症及气道重塑,亦可通过调控适应性免疫细胞如CD4~+Th2细胞的生物学活性,影响哮喘的发生发展。研究显示ILC2s对CD4~+T细胞的作用依赖于二者的直接接触。其中OX40/OX40L的相互作用在ILC2s调控CD4~+T细胞增殖与活化中至关重要。但在RSV感染诱发的气道炎症反应过程中,OX40/OX40L是否参与ILC2s对CD4~+T细胞增殖与活化的调控作用目前尚不清楚。故本研究利用RSV急性感染模型,通过体内外实验,旨在证实肺组织局部ILC2s调控CD4~+T细胞的增殖与活化,阐明OX40/OX40L在ILC2s调控CD4~+T细胞活化中的作用及相关机制,进一步认识和了解OX40/OX40L信号通路在哮喘发生发展中的作用。研究方法:建立RSV急性感染的实验动物模型,利用流式细胞术分析肺组织中CD4~+T细胞及分泌IFN-γ、IL-4、IL-5的CD4~+T细胞的数量;免疫磁珠分选CD4~+T细胞,Real-time RT-PCR检测其IFN-γ、IL-4、IL-5 mRNA的表达水平,从而证明RSV能够诱导CD4~+T细胞的增殖活化。利用ILC2s过继回输实验,证明ILC2s在RSV诱导CD4~+T细胞增殖与活化中的作用。免疫磁珠分选肺ILC2s与脾CD4~+T细胞,体外transwell共培养,通过检测CD4~+T细胞数量及其细胞因子分泌水平的变化,证明ILC2s以细胞间密切接触的方式影响CD4~+T细胞的增殖活化。利用流式细胞术、Real-time RT-PCR和Western Blot技术检测肺组织中CD4~+T细胞和ILC2s的OX40、OX40L表达水平,并利用anti-OX40LmAb,证明ILC2s通过OX40/OX40L途径调控CD4~+T细胞的增殖与活化。结果:1、RSV感染诱导肺组织内CD4~+T细胞的增殖与活化:RSV感染增加BALB/c鼠肺组织局部CD4~+T细胞及IFN-γ~+CD4~+T、IL-4~+CD4~+T、IL-5~+CD4~+T的数量,同时显著提高肺CD4~+T细胞细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5 mRNA表达水平,证实RSV感染诱导CD4~+T细胞的增殖与活化。2、ILC2s促进RSV感染后肺组织内CD4~+T细胞的增殖与活化:与未回输ILC2s的感染RSV的BALB/C鼠相比,回输ILC2s的模型鼠肺组织内的CD4~+T细胞数量及其细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5 mRNA表达水平明显增加,提示ILC2s影响CD4~+T细胞的增殖与活化。3、ILC2s促进RSV感染后CD4~+T细胞的增殖活化依赖于二者的密切接触:与CD4~+T细胞单独培养组相比,ILC2s与CD4~+T细胞混合培养组中的CD4~+T细胞数量及其细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-13 mRNA表达水平明显增加。而transwell隔断二者密切接触后则明显下调CD4~+T细胞的生物学活性。4、RSV感染后肺组织ILC2s的OX40L及CD4~+T细胞的OX40表达水平明显升高。感染RSV的BALB/C鼠肺组织内OX40~+CD4~+T及OX40L~+ILC2的细胞数量明显增加,并且OX40、OX40L的mRNA及蛋白表达水平也明显升高。提示OX40/OX40L途径可能在ILC2介导的CD4~+T细胞的活化中发挥作用。5、OX40/OX40L是ILC2s促进CD4~+T细胞增殖与活化的重要膜分子。磁珠分选RSV感染第3天的BALB/c鼠脾CD4~+T细胞和肺ILC2s,体外共培养的同时加入anti-OX40L单克隆抗体,结果显示阻断OX40/OX40L的相互作用,可明显降低CD4~+T细胞的IFN-γ、IL-2、IL-13 mRNA表达水平,提示OX40L是介导ILC2s对CD4~+T细胞作用的关键膜分子。结论:ILC2s通过OX40/OX40L途径调控RSV气道炎症反应中CD4~+T细胞的增殖与活化。