应用荧光检测法分析AMPA受体N末端结构域的相互作用

被引量 : 0次 | 上传用户:roseisdead
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
AMPA受体介导了中枢神经系统绝大部分快速型的兴奋性突触传递。在海马中大部分AMPA受体是以含GluR2的异四聚体的形式存在。AMPA受体的装配以一种“二聚化后二聚化”的模型进行装配。虽然在离子型谷氨酸受体的首次装配过程中,N末端结构域(N terminal domain NTD)起了一定的作用,但是还不清楚在活细胞中和完整的受体中NTD的相互作用的情况。我们采用荧光检测法包括双分子荧光互补法(bimolecular fluorescence complementation BiFC)和荧光共振能量转移法(Fluorescence Resonance Energy Transfer FRET)。来研究NTD的相互作用。BiFC是荧光蛋白在合适的位点打开,并标记目标蛋白,当这两片段标记的蛋白两两相互作用时,荧光蛋白能正确折叠并重建荧光团。为了方便后续的工作,我们首先构建了胞浆型和内质网型(endoplasmic reticulium ER)的表达载体。在HEK293和COS7细胞内对游离的AMPA受体GluRl亚单位的NTD进行了双分子荧光互补检测,可见黄色的荧光。证实在活细胞中,无论在内质网中还是在胞浆中,它们都能形成二聚体。为了排除蛋白之间非特异性的相互作用,我们选用代谢性谷氨酸受体的配体结合结构域(metabotropicglutamate receptor ligand binding domain mGluRl-LBD)作为阴性对照,可见微弱的非特异的相互作用.。为了检测在完整的受体中GluRl NTD的相互作用,采
其他文献
在经济发展浪潮中,煤炭企业发展速度日渐加快,但运营环境复杂化,固定资产管理难度明显提升。在日常运营管理中,煤炭企业必须从多方面入手借助创新策略,优化固定资产管理环节,
明代温病学家吴又可非常重视攻邪祛病 ,善于使用下法 ,在《温疫论》中就下法思想的提出 ,应下诸证 ,下法的目的、使用特点、常用方药等论述颇详 ,且自成体系 ,为后人正确理解
2010年3月9日至3月17日,白龟山水库向周口市调水4200万m^3,补充周口城市供水水源,通过分析本次调水的原因、过程及效果,提出了几点工作体会。
梁板式高桩码头自动化优化设计就是运用计算机语言编写程序来实现梁板式高桩码头的结构设计、构造设计以及构件配筋图的绘制,并结合工程的经济性,最终达到工程的高质量保证和
垃圾渗滤液是一种成分复杂的高浓度有机废水,若不妥善处理,会对地下水、土壤及周围环境造成严重污染.采用Fenton法和ClO2氧化法处理垃圾渗滤液,考察了pH、药剂投加量及反应时
美国纪录片大师阿尔伯特梅索斯认为,制作一部电影不是为一个问题寻求答案,而是尝试去捕捉生活本身。纪录片拍摄通常以贴近生活真实为创作目的,依托影像叙事忠实客观地记录特定时空语境人物、事件以及社会文化等。实际上,纪录片自诞生和发展以来,社会大众就赋予了它传播真实的历史责任感和社会责任感,真实亦一直是纪录片奉遵的核心命题。本文以纪录片《陕西“土”娃》为主要分析文本,就纪录片创作和拍摄过程中的凸显的“真实性
随着社会经济的发展,在中小河流发展通航及生态旅游越来越受到重视,然而,由于传统的升船机结构复杂,投资较大且与自然的和谐性差的特点,并不适合小型河道,因此,本文提出了一
仲裁的特点之一是其秘密性,因此以谋利和效率为目的的商主体在遇到国际经济争端时倾向于选择国际仲裁来解决争端。但是随着全球经济发展,国际投资主体呈现多变化趋势,由此产