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肿瘤的转移是一个多步骤、多环节的复杂过程。在这一过程中,转移性肿瘤细胞突入或游出淋巴或血流的管壁是实现转移的关键步骤之一。有关肿瘤细胞如何突破内皮细胞屏障（endothelial barrier）却知之甚少。细胞跨膜糖蛋白层黏素受体（laminin receptor,LNR）,有可能在介导肿瘤细胞引发内皮细胞屏障丧失中发挥重要作用。层黏素受体是最重要的细胞黏附分子受体之一,因此我们推想,下调胆管癌细胞层黏素受体的表达,干扰胆管癌细胞与内皮细胞间信息传递,将有可能消除或降低胆管癌突入或游出淋巴或血循环的能力,从而达到限制转移的目的。本实验设计如下:首先,流式细胞技术检测层黏素受体在高低转移胆管癌细胞亚群的表达,并通过设计层黏素受体反义寡核苷酸,转染到高转移性胆管癌细胞亚群,下调层黏素受体表达。其次,建立胆管癌细胞与人脐静脉内皮细胞直接接触以及Transwell?小室旁分泌共培养模型,光镜及电镜观察内皮细胞在与胆管癌细胞共培养条件下形态改变,免疫荧光、激光共聚焦技术、定量PCR、western blot以及明胶酶谱法检测内皮细胞在与胆管癌细胞共培养条件下功能的改变。最后,下调胆管癌细胞层黏素受体表达后,观察其与人脐静脉内皮细胞共培养后,内皮细胞形态与功能的改变,并分析层黏素受体可能参与的信号传导通路。本组实验主要的结果及结论如下:1.不同胆管癌转移亚群,层黏素受体表达存在着显著的差别。胆管癌细胞层黏素受体高表达与其体外高侵袭性呈正相关。2.层黏素受体反义寡核苷酸转染胆管癌细胞高转移亚群后可下调该细胞层黏素受体的表达,且下调作用呈剂量依赖性。3.光镜下,胆管癌细胞与内皮细胞的黏附很快,大部分黏附于相邻内皮细胞的交界处。人脐静脉内皮细胞与胆管癌细胞Transwell?小室共培养后,内皮细胞有形成管腔的趋势。扫描电镜下,胆管癌细胞与内皮细胞黏附后,相邻内皮细胞从连接处收缩,形成间隙,暴露出下面的基质,内皮细胞出现“窗口”样孔隙。4.胆管癌细胞高转移亚群转染层黏素受体反义寡核苷酸后,伴随胆管癌细胞层黏素受体的下调,胆管癌细胞与内皮细胞的黏附能力下降。5.人脐静脉内皮细胞与胆管癌细胞共培养后,内皮细胞F-actin、pp125FAK表达增强,层黏素受体反义寡核苷酸转染胆管癌细胞能其下调对内皮细胞的上述作用。6.人脐静脉内皮细胞与胆管癌细胞共培养后,内皮细胞MMP-2、MMP-9、uPAmRNA及蛋白表达增加,内皮细胞分泌MMP-2、MMP-9增加。层黏素受体反义寡核苷酸转染胆管癌细胞能减弱其对内皮细胞的上述作用。综上所述,本研究主要结论如下:1.层黏素受体是介导人脐静脉内皮细胞与胆管癌细胞黏附的重要介质。胆管癌细胞层黏素受体高表达可增强其与内皮细胞及细胞外基质的黏附能力,促进胆管癌转移。2.人脐静脉内皮细胞微丝肌动蛋白在胆管癌细胞的作用下聚合与解聚,引起收缩,导致内皮细胞间连接破坏,层黏素受体pp125FAK途径是其重要的信号传导通路。3.人脐静脉内皮细胞pp125FAK-MAPK-ERK信号途径通过层黏素受体被胆管癌细胞激活,内皮细胞蛋白水解酶mRNA及蛋白表达增强而加速内皮下基质的降解,促进胆管癌的转移。4.旁分泌途径在层黏素受体介导胆管癌细胞转移过程中所致内皮细胞屏障丧失的分子机制中亦起着重要作用。