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玫瑰(Rosa rugosa)为蔷薇科蔷薇属观赏灌木,花型优美,气味芬芳,色彩艳丽。玫瑰特有的花色、花香和抗逆性让其在园林绿化和工业生产等方面有着很高的应用价值。矮牵牛(Petunia hybrida)是植物基因工程中的模式植物。类黄酮作为植物中重要的次级代谢产物与花色的形成、抗逆性的增强以及生长素运输等有关,对于人类而言,类黄酮具有消炎、抗氧化等生理功能。近年来探索类黄酮代谢途径对植物性状进行改良和改善人类健康一直是研究热点。拟南芥CPC转录因子属于MYB转录因子家族,它通过调控结构基因的表达来影响类黄酮的生物合成。为了探索类黄酮代谢途径复杂的调控网络,本研究通过酵母双杂交从拟南芥转录因子文库中筛选出与CPC蛋白相互作用的蛋白;通过基因克隆和载体构建对类黄酮生物合成相关酶基因进行了初步研究。具体研究结果如下:1.本研究通过酵母双杂交从拟南芥转录因子文库中筛选出1个可能与CPC蛋白相互作用的蛋白。以p CAMBIA2300s-At CPC质粒为模板克隆出At CPC基因,构建了PGBKT7-At CPC诱饵载体并转化酵母Y187,通过酵母双杂交从拟南芥转录因子文库中筛选出At GATA28基因,At GATA28基因编码的蛋白可能与CPC蛋白互作。2.本研究从玫瑰和矮牵牛中克隆出6个类黄酮生物合成相关基因,并构建超量表达载体。结合野蔷薇(Rosa multiflora)转录组数据库,采用同源克隆的方式,以玫瑰c DNA为模板克隆出玫瑰Rr C4H、Rr CHS、Rr F3H和Rr CHI基因,构建了p MOG22-Rr C4H、p MOG22-Rr CHS、p MOG22-Rr F3H和p CAMBIA2300s-Rr CHI超量表达载体;从NCBI网站上找出矮牵牛Ph PAL和Ph4CL基因序列,以矮牵牛c DNA为模板克隆出Ph PAL和Ph4CL基因,构建了p CAMBIA2300s-Ph PAL和p MOG22-Ph4CL超量表达载体,把构建好的超量表达载体转入农杆菌EHA105中保存。3.本研究构建了4个烟草RNAi载体。结合烟草转录组数据库,得到烟草Nt LAR、Nt ANS、Nt ANR和Nt FLS基因序列,利用Gateway法构建了Nt FLS和Nt(LAR+ANR)RNAi载体;利用人工合成小RNA法构建了Nt LAR和Nt ANS ami RNA载体,把构建好的RNAi载体转入农杆菌EHA105中保存。