留兰香油对脂多糖或猪胰弹性蛋白酶引起的肺气肿样改变及MMP-9的影响

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaomantou_2001_78
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目的:观察留兰香油对脂多糖引起的大鼠肺气肿样改变及猪胰弹性蛋白酶引起的C57小鼠肺气肿样改变及对MMP-9的影响。方法:(1)SD大鼠随机分为6组:①空白对照组;②模型组;③留兰香油10 mg·kg-1组;④留兰香油30 mg·kg-1组;⑤留兰香油100 mg·kg-1组;⑥地塞米松0.3 mg·kg-1组。反复气道内滴入脂多糖200μg(溶于200μL生理盐水)8周建立大鼠肺气肿样改变模型,留兰香油及地塞米松灌胃治疗4周。测定大鼠肺功能气道阻力(RL)及肺顺应性(Cdyn);计数大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及其分类;肺组织病理切片行HE、AB-PAS染色,观察肺泡结构、气道炎症及杯状细胞化生,并对病理图像进行形态学测量分析;ELISA检测肺组织TNF-α、IL-1β和TIMP-1的含量及MMP-9的表达水平。所有数据使用SPSS16.0统计软件进行分析。(2)C57小鼠随机分为6组:①空白对照组;②模型组;③留兰香油14 mg·kg-1组;④留兰香油42 mg·kg-1组;⑤留兰香油141mg·kg-1组;⑥地塞米松0.42mg·kg-1组。每只C57小鼠气管内一次性滴入4.5 U(溶于50μL生理盐水)猪胰弹性蛋白酶,空白对照组气管内滴入等量生理盐水。第4周开始给药,给药3周后放血处死。肺组织病理切片行HE染色,观察肺泡结构、气道炎症,并对病理图像进行形态学测量分析;用半定量RT-PCR方法检测C57小鼠肺组织中MMP-9、TIMP-1、IL-8及TNF-αmRNA的表达量。所有数据使用SPSS16.0统计软件进行分析。结果:(1)模型组大鼠的基础RL值较对照组增加了107.6%,并且基础Cdyn值下降了17.9%;留兰香油10、30、100mg·kg-1组的大鼠RL值分别较模型组下降41.6%、11.7%、19.0%,其中留兰香油10mg·kg-1组的RL值较模型组有显著改善(P<0.05);留兰香油10、30、100 mg·kg-1组的大鼠Cdyn值较模型组增加了3.1%、16.9%、5.9%。(2)模型组大鼠BALF中白细胞总数、分类中中性粒细胞、淋巴细胞及单核巨噬细胞数均显著高于对照组(P<0.001),留兰香油100 mg·kg-1组及地塞米松治疗组与模型组比较均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。(3)模型组大鼠肺泡大小不等,结构紊乱,肺泡管、肺泡囊和肺泡明显扩张,肺泡壁变薄,并有不同程度的撕裂,融合成肺大泡,与对照组比较,肺平均内衬间隔(Lm)明显增大(P<0.001),单位面积内平均肺泡数(MAN)明显减少(P<0.001);留兰香油组及地塞米松组与模型组比较均能使LM明显减小,MAN显著增多(P<0.01,P<0.001),肺泡破坏减少。(4)模型组大鼠可见不同程度的细支气管炎及肺间质炎,炎症细胞明显浸润。留兰香油组及地塞米松组细支气管炎及肺间质炎症较模型组有所减轻,炎症细胞浸润减少,肺组织病理炎症程度明显减轻。(5)模型组与正常组比较,支气管、细支气管杯状细胞明显化生,杯状细胞阳性%明显增高(P<0.001)。留兰香油100mg·kg-1组和地塞米松治疗组较模型组阳性杯状细胞增生明显减少,杯状细胞阳性%明显降低(P<0.05)。(6) ELISA结果显示:模型组肺组织匀浆中的TNF-α含量高于对照组(P<0.05),留兰香油30 mg·kg-1组及地塞米松组与模型组比较有显著差异(P<0.05,P<0.001);模型组肺组织匀浆中的IL-1p含量高于对照组(P<0.001),留兰香油100mg·kg-1组及地塞米松组与模型组比较均有显著差异(P<0.05,P<0.01);模型组肺组织匀浆中的TIMP-1与空白对照组比较无显著性差异。(7)免疫组化图像结果表明:炎症细胞如巨噬细胞、中性粒细胞强阳性表达呈棕黄色,肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞等结构细胞弱阳性表达呈黄色。Image Pro-Plus6.0图像分析系统检测大鼠肺组织中MMP-9表达的平均光密度值(MOD),模型组肺组织MMP-9表达水平显著高于对照组(P<0.001),留兰香油组和地塞米松组与模型组比较均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。(8)C57小鼠的肺泡结构:模型组可见肺泡管、肺泡囊和肺泡明显扩张,肺泡壁变薄,并有不同程度的断裂,融合成大泡。与模型组相比,留兰香油组及地塞米松组小鼠肺泡壁断裂和肺泡腔扩张情况有所减轻。模型组与对照组比较,Lm明显增大,MAN明显减少;留兰香油42mg·kg-1组及地塞米松组与模型组比较均能使Lm明显减小,MAN显著增多,肺泡破坏减少。(9)MMP-9、TIMP-1、TNF-α、IL-8 mRNA的表达:模型组小鼠肺组织MMP-9、TIMP-1、TNF-α、IL-8与β-actin的比值较空白对照组显著升高;留兰香油14、42mg·kg-1及地塞米松组能显著降低MMP-9 mRNA的表达;留兰香油14、42、141mg·kg-1及地塞米松组TIMP-1 mRNA的表达虽较模型组有所下降,但均无显著性差异;留兰香油42、141mg·kg-1均能降低TNF-α及IL-8 mRNA的表达。结论:(1)LPS反复气道内滴入能引起大鼠伴有慢性炎症反应的肺气肿样改变,表现为肺泡腔扩大,肺泡壁变薄、断裂,融合成肺大泡,肺组织炎症细胞浸润,杯状细胞化生,而留兰香油对LPS引起的肺泡破坏、炎症反应和肺功能等均有保护作用,其机制可能是降低了肺组织TNF-α、IL-1β的含量,抑制了MMP-9的过表达。(2)留兰香油对猪胰弹性蛋白酶引起的C57小鼠肺气肿样改变也有保护作用,其机制可能与其对MMP-9、TIMP-1、TNF-α及IL-8 mRNA表达的调节作用有关。
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