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氯霉素(Chloramphenicol,CAP)是一种高效广谱性抗生素,对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有很好的抑制作用,因此作为细菌性疾病的治疗药物和饲料添加剂分别应用于人和动物。但是氯霉素对人体有较强的副作用与毒性,会导致再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症而被禁止使用。然而,由于其优良的抗菌性、稳定的药性和低廉的价格,在畜牧业及人工养殖业中仍然违法使用。目前,用于检测氯霉素残留的分析方法有色谱法、微生物法、免疫分析方法等。其中免疫分析方法是最理想的残留筛选分析方法之一,因此,研制高纯度的氯霉素单克隆抗体对动物性食品及其食用组织中氯霉素检测有重要的意义。本研究利用细胞融合技术将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经筛选、单克隆化获得了能稳定分泌CAP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并制备了含氯霉素单克隆抗体的腹水,考察了小鼠周龄、性别、诱导剂等因素对腹水制备的影响。采用硫酸铵沉淀、辛酸-硫酸铵沉淀、蛋白A亲和层析、辛酸-QSepharose等纯化方法对其进行纯化,通过比较和优化,建立了良好的纯化CAP单克隆抗体的方法。主要实验结果如下:1.获得两株能稳定分泌抗CAP单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D1,3G12,细胞培养上清液中抗体效价达10-4,腹水抗体效价达10-8。2.弗氏不完全佐剂预处理的小鼠比石蜡预处理的小鼠腹水产量高;10～12周龄小鼠腹水产量高于6～8周龄小鼠;雄性小鼠腹水产量显著高于雌性小鼠腹水产量。腹水经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后抗体纯度大于硫酸铵沉淀法,抗体纯度达78%,抗体回收率达41%,纯化后抗体的生物学活性良好。3.腹水经辛酸沉淀后上清用磷酸缓冲液(pH8.0,20mmol/LPB)上样于自装的Q Sepharose FF离子交换层析柱,pH8.0,20 mmol/L PB +0.8mol/L NaCl一步梯度洗脱,可获得纯度达90%的mAb,抗体回收率达75%,纯化后的抗体生物活性好且特异性强。4.腹水用磷酸缓冲液(pH7.0,20mmol/LPB + 3mol/LNaCl)上样于HiTrap rProtein A FF预装亲和层析柱,pH3.0,0.1 mol/LGly-HCl一步洗脱,回收抗体的纯度大于95%,抗体回收率达80%,纯化后的抗体生物活性好且特异性强。