印楝素对斜纹夜蛾学习记忆行为及生态适应性影响研究

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本论文选取印楝素作为刺激条件,模拟田间施药系统,通过斜纹夜蛾的嗅觉、味觉和视觉对斜纹夜蛾进行联系性学习记忆训练,探究印楝素对斜纹夜蛾的学习记忆行为和生态适应性的影响。从化学感受器角度出发,初步解释了印楝素拒食机理;解剖获取不同虫龄以及不同诱导方式下斜纹夜蛾的脑组织,采用免疫组化技术,分析其脑部结构及CREB蛋白的表达量,为研究鳞翅目幼虫CREB记忆蛋白提供理论支持。本文主要开展了以下研究:采用微量点滴法对斜纹夜蛾3龄幼虫口器上的刺形感受器、锥形感受器、毛形感受器、栓锥形感受器进行不同浓度印楝素处理,确定印楝素主要作用靶标,明确作用效果;结果显示只有处理栓锥形感受器和锥形感受器后,斜纹夜蛾3龄幼虫出现拒食现象,拒食率随浓度的增加而增加。筛选出斜纹夜蛾幼虫嗜好和非嗜好的蔬菜,通过幼虫的嗅觉和味觉以及使用印楝素对其化学感受器进行条件刺激后,对其进行嗜好性和厌恶性学习记忆行为训练,观察其行为变化,明确刺激条件印楝素的作用;利用幼虫的视觉和味觉以及使用印楝素对其化学感受器进行条件刺激后,对其进行厌恶性学习记忆训练,观察其行为变化,明确印楝素的作用。斜纹夜蛾3龄幼虫对芥蓝表现出嗜好性反应。通过味觉和嗅觉的联合训练方式,斜纹夜蛾3龄幼虫产生了联系性学习记忆行为。主要是嗜好性学习记忆行为、习惯性学习记忆行为和厌恶性学习记忆行为。经历芥蓝叶气味源训练的斜纹夜蛾幼虫在后期表现出嗜好性学习记忆行为,其对芥蓝气味源的首次选择率和反应率均高于对照。但在印楝素刺激下,前期经历单一芥蓝叶气味源(含印楝素刺激)的斜纹夜蛾幼虫在后期表现出厌恶性学习记忆行为,对芥蓝气味源的首次选择率和反应率均低于对照。在不同颜色光照下,斜纹夜蛾3龄幼虫对木薯叶以及含印楝素的木薯叶有不同的取食规律。随着训练时间的增加,斜纹夜蛾3龄幼虫对红光和黄光表现出嗜好性学习记忆行为,当加入印楝素作刺激下,幼虫对黄光表现出厌恶性学习记忆行为。对黄光的选择由4只减少至1只,随着训练时间的增加,厌恶性现象越明显。利用激光共聚焦技术探究CREB记忆蛋白在斜纹夜蛾幼虫脑部结构的分布,以及在印楝素处理下的分布,探讨印楝素与昆虫学习记忆之间的相互关系。采用免疫组化的方法,首次确定了斜纹夜蛾CREB蛋白在斜纹夜蛾幼虫脑中分布和表达模式。CREB蛋白在斜纹夜蛾幼虫大脑均有分布。1mg/kg印楝素处理后,2龄幼虫CREB蛋白表达量明显升高,由3.71%升至17.63%;5龄幼虫CREB蛋白明显升高,由3.29%升至28.55%。对比印楝素的不同施药方式(灌根法和喷雾法)在芥蓝幼苗上的时空动态分布差异,明确两种施药方式后斜纹夜蛾幼虫的分布动态;喷雾处理和灌根处理下,印楝素在芥蓝上及土壤中的降解符合一级动力学方程C=C0e-kt,相对降解迅速。通过喷雾处理,印楝素在芥蓝上和土壤中的半衰期分别是0.26-0.88 d和1.01 d,变异系数在0.84-0.97范围内;通过灌根处理,印楝素在芥蓝上和土壤中的半衰期分别是0.41-0.97 d和0.80d,变异系数在0.83-0.98范围内。以灌根和喷雾法对芥蓝植株进行印楝素处理,斜纹夜蛾在芥蓝植株上的分布有如下规律:有向叶缘聚合取食的现象。两种处理方式下,喷雾方法对斜纹夜蛾的防治效果快,虫口减退数高;而灌根方式处理下,防治效果慢,虫口减退数少。
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