人参皂苷Re对乙醇诱导的大鼠H4IIE肝细胞线粒体功能损伤的作用机制

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目的:研究人参皂苷Re对乙醇诱导的大鼠H4IIE肝细胞中线粒体功能的影响及其作用机制。方法:1.采用噻唑蓝(MTT法)测定通过不同浓度乙醇刺激H4IIE细胞不同时间后细胞活力水平,确定乙醇造模浓度及时间;评估不同浓度人参皂苷Re作用24 h对细胞活力水平的影响;2.实验分为空白对照组,乙醇(Et OH800 mmol/L)模型组,人参皂苷(Re 10μmol/L)组,人参皂苷+乙醇(Re 10μmol/L+Et OH 800 mmol/L)组共4组,通过流式细胞仪及荧光显微镜分别检测各组细胞的活性氧(ROS)和膜电位(MMP)变化,通过用多功能酶标仪检测各组ATP水平变化;3.采用Western blot法检测各组氧化应激相关蛋白Keap1、Nrf2、HO-1、Bach1蛋白的表达。结果:1.MTT法结果表明,乙醇对H4IIE细胞作用后的细胞生存率与空白对照组相比,随乙醇浓度和作用时间增加,细胞存活率下降(P<0.05),并且呈一定剂量-时间效应关系(P<0.05);乙醇浓度为800 mmol/L培养H4IIE细胞8 h能够建立稳定有效的体外酒精性肝损伤模型;人参皂苷Re作用24h后细胞生存率与空白对照组比较,不同浓度的人参皂苷Re作用于H4IIE细胞后均没有明显毒作用,其中10μmol/L浓度的Re处理过的细胞活性明显高于其他浓度处理组(P<0.05),10μmol/L的Re具有最大促H4IIE细胞增殖的作用,后续实验以10μmol/L为人参皂苷Re干预浓度进行后续研究。2.与空白对照组相比,乙醇组(Et OH 800 mmol/L)ROS生成明显增加、膜电位MMP、ATP水平降低(P<0.05);与Et OH组比较,人参皂苷Re预处理组ROS生成减少,MMP、ATP水平升高(P<0.05)。3.与空白对照组相比:Et OH组Keap1、total-Nrf2、nucleus-Nrf2、HO-1、Bach1表达均增加(P<0.05);人参皂苷Re组Keap1表达增加(P<0.05);人参皂苷Re预处理组各组表达较空白对照组增加(P<0.05)。与Et OH组比较:人参皂苷Re单独处理组核蛋白Nrf2表达减少(P>0.05),其余组表达均减少(P<0.05);人参皂苷Re预处理组total-Nrf2、nucleus-Nrf2、HO-1表达增加(P<0.05)。Nrf2核易位率:与空白对照组相比,乙醇组与人参皂苷Re预处理组入核率均增加(P<0.05),人参皂苷Re组减少(P<0.05);与乙醇组比较,药物预处理组入核率增加(P<0.05)。Bach1核易位率:与空白对照组相比,三组入核率均减少(P<0.05);与乙醇组比较,人参皂苷Re组和人参皂苷Re预处理组入核率减少(P<0.05)。结论:1.乙醇对大鼠H4IIE肝细胞作用导致细胞生存率下降,在一定范围内呈时间-剂量效应关系。2.乙醇对大鼠H4IIE肝细胞作用后发生线粒体功能受损。3.人参皂苷Re对酒精性肝损伤细胞具有一定的保护作用,其机制可能与保护线粒体功能及Nrf2-ARE通路的抗氧化作用相关。
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