论文部分内容阅读
肝纤维化(hepatic fibrosis)是指在慢性肝病的影响下,肝脏内弥漫性细胞外基质(特别是胶原)的过度沉积。而慢性肝病的愈伤反应过程中肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSC)扮演着十分重要的角色。在正常的肝脏中,肝星状细胞是静止的非肝实质细胞,主要的作用是储存维生素A和保持正常的基底膜成分。但是很多体内外的实验都表明,一旦HSC受到外界信号的刺激,HSC便失去储存的维生素A,变成一个快速增殖,表达Ⅰ型胶原的细胞。本文在参考文献和总结别人经验的基础上,取成年雄性SD大鼠,用链蛋白酶、胶原酶在体门静脉灌注肝脏消化大鼠肝脏细胞,经PERCOLL密度梯度离心分离肝星状细胞。台酚蓝拒染实验鉴定细胞活力,α-SMA蛋白免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。为后续实验的进行打下了基础。本文采用本实验室已经熟练掌握的异源蛋白植入法,将异源蛋白植入1.5Kg新西兰大白兔腹腔中,获得原代成肌纤维细胞。并以高细胞密度种植在盖破片上,对其进行机械损伤,研究损伤对成肌纤维细胞的形态和方向的影响。组织损伤归根结底是细胞损伤,细胞的损伤造成2种病变现象:一是组织功能缺失,二是细胞死亡后形成的间隙会改变组织的空间构象。细胞死亡形成间隙,从力学角度讲即为细胞间预应力的破坏。这会给细胞一个信号并使细胞做出响应。本文从预应力破坏角度出发,力求在体外培养条件下对细胞造成机械损伤,使用生物力学、细胞生物学、免疫组织化学、计算机图像处理等多种研究方法,观察预应力的破坏对细胞的形态和方向的影响。使用SPSS等软件对实验中涉及到的细胞角度等进行分析。主要结论如下:①取成年雄性SD大鼠,用链蛋白酶、胶原酶在体门静脉灌注肝脏消化大鼠肝脏细胞,经PERCOLL密度梯度离心分离肝星状细胞。台酚蓝拒染实验鉴定细胞活力,α-SMA蛋白免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。②将异源蛋白植入1.5Kg新西兰大白兔腹腔中,获得原代成肌纤维细胞。并以高细胞密度种植在盖破片上,进行60小时归一化培养。③将3天、5天、10天的归一化培养的成肌纤维细胞刻划,连续观察细胞的形态和方向的变化,观察极性的改变。④统计分析刻划后细胞角度、长度等,得出刻划对不同天数成肌纤维细胞的影响。⑤通过对成肌纤维细胞与刻划线所成角度的分析,得出细胞间预应力的破坏对细胞有正调控作用。