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蜜蜂囊状幼虫病毒(Sacbrood virus,SBV)是一种对蜜蜂致病性较强的病原体,具有明显的宿主特异性和地区差异性,其中感染中华蜜蜂的(Apis.cerana)SBV被称为中蜂囊状幼虫病毒(Chinese Sacbrood virus,CSBV)。一直以来CSBV严重威胁着中华蜜蜂养殖业的发展,一旦发生会对整个养蜂业造成毁灭性打击,但至今仍无有效的防治措施。本研究于2008年-2017年期间共分离得到31株CSBV,并以VP1基因为靶基因进行了核苷酸及其推导氨基酸同源性分析和遗传进化关系分析,明确了我国目前CSBV流行株具有几个分支,但新分离得到的毒株宿主特异性和区域差异性已经发生了改变。在此期间,本研究首次在山东临沂某意大利蜜蜂场从自然感染、并引起死亡的意大利蜜蜂(Apis.mellifera)幼虫样本中分离到一株CSBV(命名为:AmCSBV-SDLY,GenBank No.:MG733283.1),并通过临床观察、电镜检测、SDS-PAGE检测、琼脂凝胶免疫扩散试验检测和幼虫攻毒实验对CSBV进行了鉴定。在此基础上,对AmCSBV-SDLY基因组成及结构进行了分析,发现其基因组的核苷酸序列包括8794 bp(不包括poly A tail),碱基A、U、G和C的含量分别为29.95%、29.22%、24.30%和16.52%。核苷酸同源性达到86.8%-100%,由其推倒氨基酸的同源性达86.2%-100%。并以CSBV/SBV编码区全基因作为靶基因进行遗传进化分析,结果显示所有的SBVs/CSBVs分离株形成两个明显的分支,一个分支的SBVs/CSBVs毒株主要分离于东方蜜蜂(中华蜜蜂,命名为AC基因型),另一个分支的SBVs/CSBVs毒株主要分离于意大利蜜蜂(命名为AM基因型),AC基因型进一步分为几个分支,表现出地区差异性和宿主特异性。系统发育树的遗传进化关系也表明AmCSBV-SDLY与CSBV和其他亚洲SBVs/CSBVs分离株同属于一个分支,且AmCSBV-SDLY与CSBV-FZ(GenBank No.:KM495267.1)分离株遗传距离最近,这些结果进一步证明AmCSBV-SDLY属于CSBV。相似性分析与病毒重组分析,发现以AmCSBV-SDLY作为查询序列,源于意大利蜜蜂的AmCSBV-SDLY分离株与以前CSBV分离株具有高度的相似性,其相似度超过85%,与CSBV分离株形成了一个相对独立的分离群,与AmSBV-UK(GenBank No.:AF092924.1)分离株相似度远低于CSBV分离株,形成了明显的偏差,最大偏离度出现在2181 bp和2221 bp处,达到19.3%,但是仅CSBV-JL2014有重组信号,其重组片段总计有3段,一段来源于AmCSBV-SDLY分离株和两段来源于CSBV-FZ分离株,其次要亲本为CSBV-LN2009(GenBank No.:HM237361.1)。BootScan分析表明,分别以AmCSBV-SDLY和CSBV-JL2014(GenBank No.:KU57466.1)为查询序列,分别在1957-2162和6635-7110位点检测到AmCSBV-SDLY和CSBV-FZ的交叉重组信号。本实验首次证明CSBV能够突破种间屏障,自然感染意大利蜜蜂的幼虫,并引起其死亡,具有较强的致病性。本实验以分离到AmCSBV-SDLY作为毒种,制备CSBV灭活苗,用该疫苗免疫白来航母鸡,连续免疫3次,每次间隔2 w,并在每次免疫后7 d采集一次血,分离血清,以纯化的CSBV作为包被抗原,利用ELISA方法检测抗CSBV IgY的滴度,结果表明在首免疫后第14d开始,IgY抗体水平开始升高,到第42 d IgY抗体水平达到高峰,直至91 d仍能维持较高的抗体水平。收集首次免疫后42 d-91 d的鸡蛋,利用PEG和硫酸铵沉淀法进行抗CSBV的IgY纯化。选取2日-3日龄的幼虫作为培养体系,进行病毒中和实验,验证抗CSBV的IgY的病毒中和能力,同时分别在对2日-3日龄的幼虫接种CSBV后24 h和前24 h接种倍比稀释的抗CSBV的IgY进行幼虫保护实验,结果表明2日-3日龄的幼虫在接种CSBV前24 h,IgY滴度大于等于2~4时幼虫存活率达80%以上,而在CSBV接种后24 h,IgY滴度大于等于2~5时,幼虫存活率达80%以上,以上实验均重复3次,结果一致。根据以上结果,对已经确诊感染CSBV的400个中华蜜蜂群,用2~5的IgY进行治疗(10μL/只),治愈率为95%-100%,选取易感400个中华蜜蜂群,用滴度为2~4的IgY进行预防(10μL/只),保护率达97%。结果表明,用灭活的CSBV疫苗免疫母鸡制备的特异性IgY,可有效防治CSBV的发生,也将为中华蜜蜂囊状幼虫病(Chinese Sacbrood disease,CSBD)的综合防治提供技术支持。此研究具有重要的科学意义和广阔的社会应用前景。