论文部分内容阅读
柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus B3，CVB3)是引起病毒性心肌炎的主要病原体，至今尚无有效治疗手段。microRNA(miRNA)是非编码小RNA，广泛存在于几乎所有的生物体细胞内，通过与特定mRNA完全或不完全配对结合，诱使mRNA降解或抑制mRNA翻译，在调节基因表达上扮演着重要角色。许多病毒通过miRNAs和宿主相互作用。通过比对CVB3基因组，我们发现在CVB3基因组上可能存在miR-342-5p的靶点。为了验证miR-342-5p对CVB3的生物学意义，用带有海肾荧光素酶(Renilla luciferase，RLuc)表达的CVB3重组体(RLuc-CVB3)感染HeLa细胞，我们发现miR-342-5p可以显著抑制受感染细胞的RLuc表达。用带有绿色荧光(enhanced green fluorescence protein，EGFP)表达的CVB3重组体(EGFP-CVB3)感染HeLa细胞，miR-342-5p可以显著抑制受感染细胞的EGFP表达，但抑制作用可以被反义miR-342-5p(AMO-miR-342-5p)完全抵消。而且，实验证明CVB3野毒株的RNA复制和蛋白质生物合成也能明显被miR-342-5p抑制。通过构建含有靶序列的质粒和构建含有突变序列的质粒，证实CVB3基因组的2C-编码区的nt4989-nt5015是miR-342-5p的靶序列。由于nt4989-nt5015在CVB各型别间呈保守性，推测miR-342-5p可能对其他柯萨奇病毒也发挥抑制作用。Western blot检测结果表明miR-342-5p抑制CVB1和CVB5的表达。miR-342-5p的含量在Balb/c小鼠的肝中最低，脾中最高，肠、心和脑内含量中等，它的含量和各个组织的感染率有一定的相关性。综上所述，miR-342-5p通过靶向2C编码区内的nt4989-nt5015序列抑制CVB3生物合成和RNA复制，而且miR-342-5p同样可以抑制其他型别的CVBs的复制，体内各个组织都有一定量的内源性miR-342-5p表达，宿主miR-342-5p在先天防御CVBs感染上可能起着重要作用，并且miR-342-5p的抗病毒作用可以作为治疗CVBs相关疾病的新手段。