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目的:研究Fas/FasL、MAPK在纳洛酮保护大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。
方法:雄性SD大鼠,水合氯醛350mg/kg腹腔麻醉。结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支(LAD)30min造成缺血,2h恢复血流灌注建立心肌缺血再灌注损伤模型。40只大鼠随机分为5组:①假手术组(Sham);②缺血再灌注组(IR);③纳洛酮低剂量组(Nal L):0.5mg/kg;④纳洛酮中剂量组(Nal M):1mg/kg;⑤纳洛酮高剂量组(Nal H):2mg/kg。Sham组仅穿线,不结扎LAD。各组均于再灌注前10min尾静脉给药,Sham组和IR组给予等体积生理盐水。
采用LMS-2B型生理信号采集系统检测心电图J点的改变;HE染色法在光镜下观察心肌组织病理形态学改变;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;免疫印迹方法检测心肌组织中磷酸化JNK、p38MAPK的变化以及Fas/FasL蛋白的表达。
结果:
1.纳洛酮对心肌缺血再灌注损伤的大鼠心电图J点的影响IR组大鼠心电图J点为0.43±0.02mV,明显高于Sham组0.02±0.01mV(P<0.01);Nal各剂量组J点均低于IR组(均P<0.01),分别为IR组的74.4%、65.1%、48.8%,且纳洛酮降低J点的作用呈剂量依赖性(r=-0.935,P<0.01)。
2.纳洛酮对心肌缺血再灌注损伤的大鼠心肌病理学形态的影响病理学检查显示:Sham组大鼠心肌细胞排列整齐,着色均匀,胞膜完整,无变性坏死;IR组心肌纤维排列不规则,结构紊乱,呈波浪样变性,心肌间质有大量的炎性细胞浸润;Nal各剂量组心肌纤维排列较规则,炎性细胞浸润减少。
3.纳洛酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织中Fas、FasL蛋白表达的影响Western Blotting结果显示;IR组Fas、FasL蛋白的表达显著高于Sham组(P<0.01);Nal各剂量组Fas、FasL蛋白的表达均低于IR组(均P<0.01)。
4.纳洛酮对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织中JNK和p38MAPK磷酸化的影响Western Blotting结果显示:IR组p-JNK、p-p38MAPK蛋白的表达显著高于Sham组(P<0.01);Nal各剂量组p-JNK、p-p38MAPK蛋白的表达均低于IR组(均P<0.01)。
5.纳洛酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡的影响TUNEL结果显示:IR组的心肌细胞凋亡率为46.92±5.50%,高于Sham组3.52±0.37%(P<0.01)。与IR组相比,Nal各组凋亡阳性细胞明显减少,分别为IR组的55.4%、26.2%、27.6%(均P<0.01)。
结论:
1.纳洛酮可以明显降低大鼠心肌缺血再灌注损伤后心电图J点的抬高,减轻心肌的病理性损伤,产生保护作用;
2.大鼠心肌缺血再灌注损伤上调Fas、FasL、p-JNK以及p-p38MAPK的表达。纳洛酮通过下调Fas/FasL的表达,降低JNK、p38MAPK的磷酸化水平,减少心肌细胞凋亡,对心肌缺血再灌注损伤产生保护作用。