黄芩素通过EGFR/Akt信号通路抑制由hEGF诱导的神经胶质瘤细胞的增殖和迁移

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目的:1.观察黄芩素(baicalein,BAI)对神经胶质瘤细胞U251增殖和迁移的抑制作用以及其对蛋白EGFR和Akt磷酸化的影响;2.探讨黄芩素对神经胶质瘤细胞U251的作用机制及其临床意义。方法:1.采用CCK法检测表皮生长因子(human epidermal growth factor,hEGF)(20 ng/ml)、EGFR抑制剂—AG1478(10μM)单独和联合在不同作用时间(12 h、24 h、36 h和48 h)条件下对神经胶质瘤细胞U251增殖活性的影响;2.采用细胞划痕实验检测hEGF(20 ng/ml)、EGFR抑制剂—AG1478(10μM)单独和联合作用24 h后对神经胶质瘤细胞U251迁移的影响;3.采用Western blot检测hEGF(20 ng/ml)、EGFR抑制剂—AG1478(10μM)单独和联合作用24 h后对神经胶质瘤细胞U251中蛋白EGFR和Akt磷酸化的影响;4.采用CCK法检测不同浓度黄芩素(20μM、40μM和80μM)、hEGF(20 ng/ml)单独和联合在不同作用时间(12 h、24 h、36 h和48 h)条件下对神经胶质瘤细胞U251增殖的影响;5.采用细胞划痕实验检测不同浓度黄芩素(20μM、40μM和80μM)、hEGF(20 ng/ml)单独和联合作用24 h后对神经胶质瘤细胞U251迁移的影响;6.采用Western blot检测不同浓度黄芩素(10μM、20μM、40μM和80μM)、hEGF(20 ng/ml)单独和联合在不同作用时间(6 h、12 h、24 h和36 h)条件下对蛋白EGFR和Akt磷酸化的影响;7.采用免疫荧光技术检测黄芩素(80μM)、hEGF(20 ng/ml)单独和联合作用24 h后对神经胶质瘤细胞U251中蛋白EGFR和Akt磷酸化的影响。结果:1.hEGF(20 ng/ml)作用U251细胞24 h后,明显促进细胞中蛋白EGFR和Akt的磷酸化;2.hEGF(20 ng/ml)作用U251细胞不同时间(12 h、24 h、36h和48h)后对细胞的增殖具有明显促进作用,时间越长,促进作用越显著;3.hEGF(20 ng/ml)作用U251细胞24 h后对细胞的迁移具有明显促进作用;4.不同浓度黄芩素(10μM、20μM、40μM和80μM)作用U251细胞24 h后,明显抑制U251细胞中蛋白EGFR和Akt的磷酸化,并且阻断了hEGF对其的促进作用,浓度越高,抑制作用越明显;5.相同浓度黄芩素(80μM)作用U251细胞不同时间(6 h、12 h、24 h和36 h)后,明显抑制U251细胞中蛋白EGFR和Akt的磷酸化,并且阻断了hEGF对其的促进作用,作用时间越长,抑制作用越明显;6.不同浓度黄芩素(20μM、40μM和80μM)作用U251细胞不同时间(12 h、24 h、36 h和48 h)后,明显抑制U251细胞的增殖并且阻断了hEGF诱导的细胞增殖作用,浓度越高,作用时间越长,抑制作用越明显;7.不同浓度黄芩素(20μM、40μM和80μM)作用U251细胞24 h后,明显抑制U251细胞的迁移并阻断了hEGF诱导的细胞迁移作用,作用时间越长,抑制作用越明显;结论:1.hEGF通过EGFR/Akt信号通路促进U251细胞的增殖和迁移;2.黄芩素通过EGFR/Akt信号通路抑制由hEGF诱导的U251细胞的增殖和迁移。
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