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背景:卵巢癌是女性生殖器常见的三大恶性肿瘤之一,其中,上皮性卵巢癌最为常见。上皮性卵巢癌发病隐匿,早期没有明显的临床症状及体征,且缺乏有效的筛查及诊断方法,超过70%的患者确诊时已处于晚期,其5年生存率仅约30%,已严重的威胁了广大女性的生命健康。因此,研究卵巢癌的发病机制,寻找早期筛查、诊断相关的生物标记物,及有效的治疗靶点是目前亟需解决的问题。14-3-3蛋白是一类高度保守的小分子酸性多肽,分子量约为28-33 kDa,广泛存在于真核生物体内。到目前为止,超过200个14-3-3蛋白的结合配体被证实,通过调节各种结合配体的功能,14-3-3蛋白参与调节很多重要的细胞过程,如细胞分化,增殖,信号转导,囊泡运输等。越来越多的研究证实14-3-3蛋白家族与多种肿瘤的发生发展有着密切联系,在肿瘤的生长和进展中发挥着重要的作用。基于前期的研究基础,本实验拟检测14-3-3β蛋白在卵巢浆液性腺癌组织中的表达,进一步探索其对浆液性卵巢癌细胞生物学功能的影响。 目的:检测14-3-3β蛋白在卵巢浆液腺癌组织中的表达情况,分析14-3-3β的表达与卵巢浆液性腺癌临床病理特征之间的关系;通过转染14-3-3β过表达和干扰质粒,改变卵巢癌细胞中14-3-3β蛋白的表达水平,进而观察该基因对卵巢癌细胞生物学行为的影响,探究14-3-3β蛋白在卵巢癌的发展进程中发挥的生物学作用。 方法: 1.免疫组织化学法检测14-3-3β在100例卵巢浆液性腺癌、49例卵巢浆液性腺瘤和54例正常输卵管伞端组织标本中的表达水平,采用统计方法分析14-3-3β的表达与卵巢浆液性腺癌临床病理特征之间的关系。 2.转染14-3-3β过表达和干扰质粒到卵巢癌HO8910细胞中,利用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测转染后细胞中14-3-3β的表达情况。 3.对转染过表达及干扰质粒的卵巢癌HO8910细胞进行功能学实验:采用MTT法检测14-3-3β对肿瘤细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测14-3-3β对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响;划痕实验检测14-3-3β对肿瘤细胞划痕愈合能力的影响;细胞流式实验检测14-3-3β对肿瘤细胞周期及凋亡的影响。 结果: 1.免疫组化结果发现:14-3-3β在卵巢浆液性腺癌中的阳性表达率为45%(45/100),在卵巢浆液性腺瘤中的阳性表达率为6.5%(3/49),在正常输卵管伞端中的阳性表达率为7.4%(4/54)。14-3-3β在腺癌组织中的阳性表达率显著高于腺瘤和输卵管伞端组织,差异具有统计学意义(P<0.005)。14-3-3β的阳性表达与患者年龄呈正相关,而与肿瘤细胞的分化,FIGO分期及淋巴结转移无明显关联。 2.与空白对照组和空质粒组相比较,转染14-3-3β过表达质粒的卵巢癌HO8910细胞内14-3-3β在mRNA水平和蛋白水平表达量均显著上调;转染14-3-3β干扰质粒的卵巢癌HO8910细胞内14-3-3β在mRNA水平和蛋白水平表达量均显著降低。 3.与对照组相比较,转染14-3-3β过表达质粒可促进卵巢癌HO8910细胞的迁移及侵袭,促进划痕的愈合,抑制癌细胞的凋亡,但是对癌细胞的增殖能力和细胞周期无明显影响。 4.与对照组相比较,转染14-3-3β干扰质粒可抑制卵巢癌HO8910细胞的迁移及侵袭,减缓划痕的愈合,促进癌细胞的凋亡,对癌细胞的增殖能力和细胞周期无明显影响。 结论: 1.14-3-3β在卵巢浆液性腺癌组织中的阳性表达率显著高于腺瘤和输卵管伞端组织,可能在卵巢浆液性腺癌的发生发展进程中发挥着癌基因的作用,对于卵巢癌的早期诊断及靶向治疗具有潜在意义。 2.14-3-3β可促进卵巢癌HO8910细胞迁移及侵袭能力,抑制癌细胞的凋亡,对癌细胞增殖和细胞周期无明显影响,提示14-3-3β在卵巢癌的生物学进展中可能发挥了重要作用。