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目的:结直肠癌是一种常见的严重危害人类健康的恶性肿瘤,是指发生于结肠或者是直肠的癌变,尤以直肠、乙状结肠最为常见,在全球范围内,结直肠癌发病率在所有恶性肿瘤中位居第三位,男性发病率高于女性。结直肠癌发病早期缺乏特异性症状表现而容易被患者忽视。维族药盐酸去氢骆驼蓬碱(harmine,HM)已证实对结直肠癌有显著的抑制作用。但HM在全身注射时可引起中枢神经毒性,限制了其临床应用。在本研究中,我们制备了HM原位凝胶制剂用于结直肠部位的局部给药,并评价其体内外抗结直肠癌的应用效果。方法:(1)使用高效液相色谱(HPLC)法建立HM含量测定方法。(2)采用单因素实验设计,考察HM、苯扎溴铵、泊洛沙姆407(P407)和泊洛沙姆188(P188)用量对凝胶温度的影响,然后采用星点设计-响应面法优化HM原位凝胶配方,对P407、P188以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)的用量进行优选。(3)通过检测HM原位凝胶的粘度、直肠滞留力,体外释放情况确定最优处方。(4)体外应用评价:CCK-8法考察HM原位凝胶对结肠癌CT26细胞增殖抑制能力;Annexin V-FITC/PI双染色法测定HM原位凝胶诱导的凋亡细胞百分率;划痕法考察HM原位凝胶抑制CT26细胞迁移能力。(5)体内应用评价:将CT26细胞经直肠黏膜下注射到BALB/c小鼠的直肠部位,建立结直肠癌小鼠模型,通过肿瘤体积、肺组织的病理切片、肿瘤的凋亡情况和生存率来评价药物体内抗肿瘤效果。结果:(1)HPLC法HM含量的方法学验证结果显示,HM在2.5-200μg/m L浓度范围内与峰面积线性关系良好,精密度及加样回收率符合要求。(2)单因素实验表明,苯扎溴铵和HM对凝胶化温度影响不明显,而P407随着浓度的增加,凝胶化温度逐渐降低,但P188随着浓度的增加,胶凝温度是逐渐升高的。星点设计结果与单因素考察结果一致,且HPMC对凝胶温度变化影响不大。直肠滞留结果显示HM原位凝胶在大鼠直肠给药后不会出现泄漏,且能在体内滞留6 h以上,其体外释放符合Weibull模型。最终确定最优处方为HM 1.2%,HPMC 0.93%,P188 2.13%,P407 20.7%,苯扎溴铵0.02%。(3)体外应用结果显示,HM原位凝胶对CT26细胞具有明显的增殖抑制能力;HM原位凝胶可以诱导CT26细胞的凋亡,HM原位凝胶组晚期凋亡细胞比例为(19.11%±1.61%);HM原位凝胶可以抑制CT26细胞的横向迁移。(4)小鼠体内应用结果显示,HM原位凝胶组的瘤重、肺组织肿瘤转移、肿瘤凋亡面积和生存率结果均优于对照组、空白凝胶组和HM纯药组。结论:(1)建立的HM含量测定方法符合实验要求。(2)制备的HM原位凝胶理化性质良好,制备工艺设计合理。(3)在体内外应用中,HM原位凝胶对结直肠癌的生长和转移均有明显的抑制作用。并且HM原位凝胶组的体内抗肿瘤效果优于HM纯药组并且在一定程度上降低了HM的毒性。综上所述,HM原位凝胶对结直肠癌具有明显的抗肿瘤应用效果,有望成为治疗结直肠癌的一种有应用前景的给药新制剂。