【摘 要】
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戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）是一种严重危害人类健康的病毒性肝炎病原体,其发病率居人急性病毒性肝炎之首。戊型肝炎早期一直被认为是一种急性自限性疾病,感染者排毒3～4周后可自行康复。随着戊肝研究的深入,关于戊肝病毒持续性感染的临床报道日渐增多。但是HEV持续性感染的致病机制尚不清楚。本文旨在从宿主免疫抑制和病毒突变两个方面,在动物和细胞两个水平,建立HEV持续性感染动物模
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戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）是一种严重危害人类健康的病毒性肝炎病原体,其发病率居人急性病毒性肝炎之首。戊型肝炎早期一直被认为是一种急性自限性疾病,感染者排毒3～4周后可自行康复。随着戊肝研究的深入,关于戊肝病毒持续性感染的临床报道日渐增多。但是HEV持续性感染的致病机制尚不清楚。本文旨在从宿主免疫抑制和病毒突变两个方面,在动物和细胞两个水平,建立HEV持续性感染动物模型,初步探究HEV持续性的分子机理。本研究工作主要包括五个方面:（1）建立免疫抑制导致HEV持续性感染BALB/c小鼠动物模型,探究宿主免疫抑制与HEV持续性感染之间的关系;（2）构建HEV基因突变毒株,验证其感染性;（3）建立病毒基因组突变导致HEV持续性感染BALB/c小鼠动物模型,探究病毒基因组突变与HEV持续性感染之间的关系;（4）在细胞水平探究HEV持续性感染的致病机制;（5）利用HEV持续性感染模型,进行抗HEV药物的初步筛选。（1）建立免疫抑制导致HEV持续性感染BALB/c小鼠动物模型,探究宿主免疫抑制与HEV持续性感染之间的关系本文通过使用临床常用免疫抑制剂（雷帕霉素和他克莫司）使BALB/c小鼠免疫抑制,BALB/c小鼠接种基因4型HEV急性毒株后表现为持续性感染,在粪便、血清和组织样品持续30周HEV RNA阳性。成功建立HEV持续性感染动物模型,为探究宿主免疫与HEV持续性感染奠定基础。（2）构建HEV基因突变毒株,细胞水平验证其感染性本文运用反向遗传学技术,针对前期实验发现的HEV基因组突变区域构建了三种重组HEV病毒（突变区域80-85 aa和400-426 aa重组毒株G1-HEV,突变区域80-85 aa重组毒株G2-HEV和突变区域400-426 aa重组毒株G3-HEV）。利用重组HEV病毒转染A549肺癌细胞,验证重组病毒的感染性,观察到重组病毒能够在A549中进行大量复制。（3）建立病毒基因组突变导致HEV持续性感染BALB/c小鼠动物模型,探究病毒基因组突变与HEV持续性感染之间的关系利用突变的三种重组HEV毒株接种BALB/c小鼠,发现重组毒株G1-HEV组（80-85 aa和400-426 aa突变）的小鼠粪便、血清和组织持续40周HEV RNA阳性,并导致肝脏严重的病理损伤及肝纤维化,成功建立HEV持续性感染动物模型。但是接种重组毒株G2-HEV（80-85 aa突变）和重组毒株G3-HEV（400-426aa突变）的两组小鼠,感染11周后即排毒结束,没有造成HEV持续性感染。（4）在细胞水平探究HEV持续性感染的分子机制本文利用造成HEV急性和持续性感染的活病毒,以及重组HEV毒株在细胞水平检测干扰素刺激基因的相对表达水平,比较并分析了HEV持续性感染抵抗宿主天然免疫抗病毒反应的分子机制。（5）利用HEV感染动物模型,进行抗HEV药物的初步筛选目前临床还没有针对戊型肝炎的特效药物,本文利用HEV持续性感染BALB/c小鼠动物模型,进行戊型肝炎药物的筛选,发现利巴韦林、干扰素和索非布韦单用或者联合使用,均对基因四型HEV持续性感染没有显著性疗效。本文研究结果表明宿主免疫抑制和病毒基因组的突变,均会造成HEV持续性感染。证实宿主免疫抑制和病毒突变可能是造成HEV持续性感染的重要原因。本实验还利用HEV持续性感染BALB/c小鼠动物模型,进行抗HEV药物的初步筛选。此外,HEV持续性感染性动物模型的成功建立,为进一步探究HEV急性和持续性感染的致病机理及抗HEV药物筛选等方面的研究奠定了基础。
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