胞苷脱氨酶在膀胱尿路上皮癌中的表达情况及其对膀胱癌细胞生物学行为的影响

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目的:  1、从膀胱癌细胞株中筛选出与膀胱癌进展相关的高表达基因;  2、探讨胞苷脱氨酶(cytidine deaminase,CDA)在膀胱尿路上皮癌中的表达情况,并研究CDA与临床病理参数及预后的关系;  3、通过体外实验研究CDA对膀胱癌细胞侵袭能力、干性能力的影响。  方法:  1、应用transwell法建立膀胱癌5637细胞系低侵袭能力(5637-NM)和高侵袭能力(5637-HM)细胞株,通过芯片检测不同侵袭能力细胞株中差异表达基因,分析后确定研究对象。  2、应用实时定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Weatern blot)分别检测10对膀胱尿路上皮癌组织及其癌旁正常尿路上皮组织中CDA的表达情况;通过GEO数据库分析膀胱尿路上皮癌组织及正常尿路上皮组织中CDA的表达情况;应用免疫组织化学染色技术(immunohistochemistry,IHC)检测30例膀胱尿路上皮癌组织中CDA的表达情况,应用统计学方法分析其表达量与临床病理参数之间的关系,以及对患者预后的影响。  3、体外实验中,应用siRNA干扰膀胱癌5637 HM细胞株中CDA的表达。通过transwell实验研究其对膀胱癌细胞侵袭能力的影响;通过流式细胞术、成球实验检测其对膀胱癌细胞干性能力的影响。  结果:  1、芯片结果显示CDA等基因在高侵袭能力膀胱癌细胞系中异常高表达,CDA被确定为研究对象。  2、RT-qPCR组10对膀胱癌组织及其癌旁正常尿路上皮中,7对(70%)膀胱癌组织中CDA的表达量高于其癌旁组织,2对(20%)无明显变化,仅1对(10%)下降。Weaternblot组10对膀胱癌组织及其癌旁正常尿路上皮中,8对(80%)膀胱癌组织中CDA的表达量高于癌旁正常尿路上皮组织中的表达量。GEO数据库中,CDA在肌层浸润性膀胱癌的患者亚群中呈高表达。IHC组30例膀胱癌组织中CDA的表达与膀胱癌肌层进展与否有关,生存分析结果显示,CDA高表达的患者总体生存率低于CDA低表达的患者,提示CDA可能会成为膀胱癌的预后指标。  3、体外实验显示,CDA下调后,膀胱癌侵袭能力显著减弱;干性相关标志物CD44,HMGA2,SOX-2等有下调趋势。流式细胞术和成球实验证实CDA的缺失会减弱膀胱癌细胞的干性能力。提示CDA可能通过改变膀胱肿瘤细胞的干性,进而影响肿瘤侵袭转移的能力。  结论:  1、膀胱尿路上皮癌中CDA异常高表达,且与肿瘤浸润程度相关,提示CDA可能参与了膀胱癌的发生和发展,是一个新的肿瘤标记物,并有助于膀胱癌的预后评估。  2、体外实验证实CDA下调可以减弱膀胱癌细胞的干性能力,抑制膀胱癌细胞的侵袭能力。
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