【摘 要】
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研究背景及目的尽管EGFR-TKIs已作为—线治疗方案用于EGFR突变肺癌患者的治疗,然而EGFR原位突变及冗杂错综的旁路代偿机制极大地限制了 EGFR-TKIs的临床疗效,探索改善EGFR-TKI耐药肺癌患者生存及预后的治疗策略意义重大。近年来研究发现靶向肿瘤免疫逃逸及代谢重编程可有效地抑制肿瘤的生长,明确EGFR-TKI耐药肺癌患者肿瘤PD-L1及代谢的改变可为EGFR-TKI耐药肺癌提供新的
【基金项目】
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国家自然科学基金（81572966）； 广东省自然科学基金（2017A030313883）；
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研究背景及目的尽管EGFR-TKIs已作为—线治疗方案用于EGFR突变肺癌患者的治疗,然而EGFR原位突变及冗杂错综的旁路代偿机制极大地限制了 EGFR-TKIs的临床疗效,探索改善EGFR-TKI耐药肺癌患者生存及预后的治疗策略意义重大。近年来研究发现靶向肿瘤免疫逃逸及代谢重编程可有效地抑制肿瘤的生长,明确EGFR-TKI耐药肺癌患者肿瘤PD-L1及代谢的改变可为EGFR-TKI耐药肺癌提供新的治疗思路。方法通过分析EGFF-TKIs耐药前后肿瘤标本及TCGA数据库资料明确EGFR-TKI耐药前后肺癌组织内PD-L1的改变。体内及体外建立HGF、c-MET扩增及EGFR-T790M突变EGFR-TKIs耐药模型,明确细胞表面PD-L1的表达并比较免疫细胞对前述细胞及皮下瘤的杀伤能力。通过RNA-sequence和RT-qPCR明确EGFR-TKIs耐药肺癌PC-9GR5与亲代细胞PC-9的代谢差异,TCGA数据库分析代谢相关差异基因对患者生存的影响。采用小分子抑制剂或si-RNA抑制ACC阻断PC-9GR5及PC-9细胞内脂肪酸从头合成途径后,明确细胞生长增殖、细胞内活性氧、细胞周期、凋亡及EGFR-TKIs敏感性的改变。采用440种细胞因子芯片检测PC-9GR5的细胞上清液明确其耐药原因并明确其对脂肪酸从头合成的影响。结果我们发现EGFR-TKIs耐药后肿瘤PD-L1的表达增高,HGF、c-MET的表达与PD-L1呈正相关。体外实验证实HGF、c-MET扩增可通过PI3K及MAPK通路上调肺癌细胞内PD-L1的表达,降低T细胞的杀伤能力。而EGFR-T790M突变通过PI3K、MAPK及NF-κB通路调控PD-L1的表达。敲除或封闭PD-L1可恢复免疫细胞对EGFR-TKIs耐药细胞及皮下瘤的杀伤效果。RNA-sequence和RT-qPCR结果提示PC-9GR5细胞内脂质代谢出现异常,脂肪酸从头合成途径相关激酶的基因ACC、FASN、ACLY的表达增高。K-M分析结果表明ACC高表达的EGFR突变肺癌患者较ACC低表达的患者总生存OS明显缩短。相比PC-9细胞及其皮下瘤,抑制ACC阻断脂肪酸的从头合成可有效地抑制PC-9GR5细胞及其皮下瘤的生长增殖,提高细胞内活性氧水平,细胞凋亡的比例增高,细胞出现G2/M期阻滞,EGFR-TKI联合ACC抑制剂对PC-9GR5的抑制效果更佳。细胞因子检测结果提示PC-9GR5细胞可大量分泌FGF2与FGF21,抑制FGF/FGFR通路能有效抑制PC-9GR5细胞的增殖并下调SREBP-1、ACC、ACLY基因的表达。结论EGFR突变肺癌出现EGFR-TKIs耐药后内PD-L1的表达增高,肿瘤细胞免疫逃逸能力增强;敲除或封闭PD-L1可恢复T细胞对EGFR-TKIs耐药细胞及皮下瘤的杀伤能力。HGF、c-MET扩增可通过PI3K及MAPK通路可上调EGFR突变肺癌细胞内PD-L1的表达,而EGFR-T790M突变则通过PI3K、MAPK及NF-κB通路调控PD-L1的表达。EGFR-TKIs耐药后肺癌细胞内脂质代谢出现异常,抑制ACC干扰脂肪酸从头合成途径可抑制EGFR-TKIs耐药肺癌细胞及皮下瘤的增殖,抑制ACC联合EGFR-TKI的抑制效果更佳。抑制FGF/FGFR通路可抑制EGFR-TKIs耐药肺癌细胞的生长,并下调脂肪酸从头合成相关基因的表达。
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