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目的:MiRNA是近年来发现的长约19-25个核苷酸的非编码小RNA，表达具有明显的组织特异性，且与肿瘤的发生发展密切相关。研究发现miRNA可以调控造血细胞生成，并改变细胞增殖、分化及凋亡。MiRNA-21是miRNA家族中的重要成员之一，通过调控靶基因及下游信号通路，调控肿瘤发生。已知抑癌基因10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物PTEN为miRNA-21的靶基因之一，具有抑癌活性，且PTEN可以负调控PI3K/AKT通路活性，从而抑制血管新生并降低肿瘤细胞的增殖及侵袭。在白血病的发生发展中，PTEN-PI3K/AKT通路起到了重要作用。 白血病是一种起源于骨髓多能干细胞的恶性克隆增生性疾病。其主要表现为细胞恶性增殖、分化障碍、凋亡受阻等，使肿瘤细胞在骨髓及其他造血系统堆积，并可以浸润其他组织及器官，影响正常造血功能。随着近年来对白血病发病机制的不断研究，越来越多的肿瘤信号通路被发现，其中以PI3K/AKT介导的信号通路成为白血病发病及治疗的研究热点。 本实验旨在K562细胞中转染miRNA-21抑制物inhibitor，通过MTT和流式细胞仪技术分析miRNA-21下调后对K562细胞增殖及早期凋亡的影响;并检测细胞转染后PTEN-PI3K/AKT通路相关基因表达变化，进一步通过Western blot检测miRNA-21与PTEN蛋白表达的相关性。 方怯:体外培养K562细胞，将细胞分为4组，分别为:空白组、转染组、随机序列对照组、荧光素对照组。通过电转染，将化学合成的miRNA-21 inhibitor转染对数增长期的K562细胞，通过荧光倒置显微镜观察细胞形态，检测细胞转染率，MTT及流式细胞仪检测细胞增殖及凋亡盼变化，RT-PCR及Western-blot检测PTEN-PI3K/AKT通路表达变化。 结果: 1、RT-PCR方法检测miRNA-21 inhibitor在K562细胞系中的转染效率RT-PCR结果显示，miRNA-21 inhibitor转染K562细胞后miRNA-21在转染组、随机序列对照组及荧光素对照组相对空白组表达比例分别为（8.070±5.138）％、(91.600±2.452)％、(92.247±2.053)％,转染组miRNA-21表达较其他三组明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。 2、MiRNA-21 inhibitor封闭miRNA-21表达对K562细胞增殖的影响 在转染12h、24h、36h、48h、60h后，应用MTT检测细胞增殖抑制率，相对于空白组细胞，不同时间段转染组细胞增殖抑制率分别为（2.6±0.4）％、（8.1±1.0）％、(15.5±1.4)％、（29.1±2.2）％、（43.1±3.1）％，随机序列对照组细胞增殖抑制率分别为（3.6±0.5）％、（7.6±0.9）％、（4.6±0.7）％、（4.3±0.6）％、（3±0.5）％，荧光素对照组细胞增殖抑制率分别为（2.9±0.3）％、（2.8±0.4）％、（5.6±1.0）％、（4.1±0.6）％、（5.7±0.9）％。转染组K562细胞增殖明显减慢，差异有统计学意义(P＜0.05)。 3、MiRNA-21 inhibitor封闭miRNA-21表达对K562细胞凋亡的影响 流式细胞仪结果显示，转染48h后空白组、转染组、随机序列对照组及荧光素对照组细胞凋亡率分别为（2.334±0.263）％、（13.370±0.250）％、（3.990±0.436）％、(2.894±0.352)％，转染组中凋亡细胞百分比显著高于其他三组，差异有统计学意义(P＜0.05)。 4、抑制miRNA-21后K562细胞PTEN基因表达变化 PTEN蛋白在空白组、转染组、随机序列对照组及荧光素对照组的相对表达量分别为(4.911±0.450)、（14.701±0.810）、(4.733±0.524)和（4.271±0.682），转染组PTEN蛋白表达较其他三组明显增高，差异有统计学意义(P＜0.05)。 5、抑制miRNA-21后K562细胞PI3K蛋白表达变化 PI3K蛋白在空白组、转染组、随机序列对照组及荧光素对照组的相对表达量分别为（3.343±0.201）、（1.015±0.122）、（3.220±0.111）和（3.439±0.098），转染组PI3K蛋白表达较其他三组明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。 6、抑制miRNA-21后K562细胞磷酸化AKT(p-AKT)基因表达变化 P-AKT蛋白在空白组、转染组、随机序列对照组及荧光素对照组的相对表达量分别为（3.040±0.094）、(0.463±0.080)、（3.628±0.103）和（3.447±0.139），转染组p-AKT蛋白表达较其他三组明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论: 1、抑制miRNA-21表达诱导K562细胞早期凋亡，抑制K562细胞增殖。 2、抑制miRNA-21可以通过上调PTEN表达而抑制PI3K/AKT信号通路，从而发挥其抗细胞增殖及促凋亡作用。