三草素的药效学和急性毒性研究

被引量 : 2次 | 上传用户:wyt20070210
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目的:研究三草素的药效学和急性毒性,通过抗炎、解热、镇痛、免疫功能、化痰止咳及初步探讨三草素的抗炎机制和急性毒性进行三草素的相关研究,观察三草素的药效学和毒性范围,为三草素新药的研发及临床应用提供一定的实验依据。方法:1.三草素的药效研究:(1)抗炎:采用二甲苯致小鼠耳廓炎症肿胀实验;对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响实验;角叉菜胶致大鼠足趾肿胀实验;大鼠棉球肉芽肿实验,研究三草素的抗炎作用。(2)解热:采用面包酵母混悬液致大鼠发热实验;内毒素致兔发热实验,研究三草素的解热作用。(3)镇痛:采用小鼠热板致痛法实验;小鼠醋酸致痛扭体法实验,研究三草素的镇痛作用。(4)免疫:采用小鼠网状内皮系统(RES)吞噬功能实验,研究三草素的免疫作用。(5)化痰止咳:采用小鼠气管酚红排泌量实验;小鼠SO2致咳实验,研究三草素的化痰止咳作用。2.三草素的急性毒性研究:采用改良寇氏法测定三草素半数致死量(LD50)。3.三草素抗炎机制的初步研究——三草素含药血清对RAW264.7巨噬细胞的影响:(1)MTT法测定RAW264.7细胞的生长曲线。(2)MTT法检测三草素含药血清对RAW264.7细胞增殖的影响。(3)MTT法检测三草素含药血清对LPS诱导的RAW264.7细胞增殖的影响。(4)ELISA法考察三草素含药血清对LTB4生成及对IL-1β、IL-6、TNF-a细胞因子产生的影响。结果:1.(1)抗炎:三草素对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性、对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀均有一定的抑制作用,并能明显抑制大鼠棉球肉球肿的生成,三草素具有显著的抗炎作用。(2)解热:三草素对20%面包酵母所致大鼠发热、对大肠杆菌内毒素所致新西兰兔发热均有明显的解热作用,三草素具有较好的解热作用。(3)镇痛:三草素能明显提高热板致痛小鼠的痛阈值,能减少0.5%醋酸所致的小鼠扭体反应次数,具有明显的镇痛作用。(4)免疫:三草素具有增强小鼠网状内皮系统(RES)对颗粒状异物(印度墨汁)的吞噬功能。(5)化痰止咳:三草素能增加小鼠气管内酚红的排泌量,具有明显的祛痰作用;三草素能够延长对SO2所致的小鼠咳嗽潜伏期以及减少咳嗽次数,具有明显的止咳作用。2.三草素的急性毒性研究:测得三草素小鼠灌胃给药的半数致死量为185.8541g/kg,为人的临床给药拟用量(0.5g/kg)的317倍。3.三草素抗炎机制的初步研究:(1)MTT法测定RAW264.7细胞的生长曲线:RAW264.7细胞从第一天到第五天缓慢生长,生长趋势较稳定,从第五天开始生长迅速,第七天达到最高峰。(2)MTT法检测三草素含药血清对RAW264.7细胞增殖的影响:三草素含药血清具有促性RAW264.7细胞增殖的活性,无细胞毒性。(3)MTT法检测三草素含药血清对LPS诱导的RAW264.7细胞增殖的影响:三草素含药血清具有抑制经LPS导的RAW264.7细胞的生长活性,抑制RAW264.7细胞的增殖。(4)ELISA法考察三草素含药血清对LTB4生成及对IL-1β、IL-6、TNF-α细胞因子产生的影响:RAW264.7细胞经LPS诱导后促进LTB4的生成,三草素含药血清具有抑制LTB4生成的作用;RAW264.7细胞经LPS诱导后促进IL-1β、IL-6、TNF-α细胞因子的产生,三草素含药血清具有抑制IL-1β、IL-6、TNF-a细胞因子产生的作用。结论:三草素具有抗炎、镇痛、解热、免疫、化痰止咳的药效作用。三草素的急性毒性研究测定小鼠的半数致死量为185.8541g/kg,为人的临床给药剂量(0.5g/kg)的317倍,因此,三草素的急性毒性较小,在常规剂量下服用安全可靠。三草素含药血清具有促进RAW264.7细胞增殖的活性,无细胞毒性;RAW264.7细胞经LPS诱导后,三草素含药血清具有抑制LTB4生成的作用以及抑制IL-1β、IL-6、TNF-α细胞因子产生的作用,初步表明三草素可能是通过降低上述炎症介质的分泌而发挥抗炎作用,三草素对巨噬细胞具有免疫调节作用,但是其与巨噬细胞的相互作用的途径仍不明确,三草素激活巨噬细胞的机制研究需要深入展开进一步研究证实。
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