论文部分内容阅读
第一章组织金属蛋白酶抑制因子-1蛋白对骨髓基质细胞MBA-1分化和凋亡的作用机制研究
目的：研究重组组织金属蛋白酶抑制因子-1(tissueinhibitorofmetalloproteinase-1,TIMP-1)蛋白对前体成骨细胞-骨髓基质细胞MBA-1凋亡及分化的影响。
方法：碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)的活性用ELISA检测。骨钙素(Osteocalcin，OC)用RIA法检测。细胞存活率用MTT法检测；细胞凋亡用ELISA，流式细胞分析及吖啶橙/溴乙啶染色检测。Bcl-2，Bax，caspase-3，cytochromeC，p-JNK，JNK，p-p38，p38，p-ERK1/2，ERK1/2用WesternBlot检测。PI3-kinasep85α用免疫沉淀法检测。
结论：TIMP-1通过PI3-kinase及JNK信号转导途径抑制MBA-1细胞凋亡。
第二章组织金属蛋白酶抑制因子-1在调控MBA-1凋亡与分化中的作用机制研究
目的：研究组织金属蛋白酶抑制因子-1(tissueinhibitorofmetalloproteinase-1,TIMP-1)是否通过抑制基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMP)活性途径调控骨髓基质MBA-1细胞凋亡与分化。
方法：用逆转录酶PCR获得TIMP-1全长cDNA，T-A克隆TIMP-1全长cDNA，构建TIMP-1重组表达载体及TIMP-1突变体表达载体，分别用脂质体转染至小鼠骨髓基质细胞MBA-1，观察pcDNA3.1TIMP-1及其突变体表达载体转染对MBA-1细胞分化和凋亡的影响。TIMP-1蛋白质表达用WesternBlot检测。活性MMP-2，-9的活性用ELISA检测。细胞存活率及凋亡用MTT，ELISA检测。碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)的活性用ELISA检测。骨钙素(Osteocalcin，OC)用RIA法检测。
结论：TIMP-1高表达可抑制MBA-1细胞凋亡，此作用与其抑制MMPs的抑制活性无关。TIMP-1通过非MMP途经抑制MBA-1细胞凋亡。
第三章绝经后妇女血清组织金属蛋白酶抑制因子-1和基质金属蛋白酶-1、-2与骨转换生化指标及骨密度的关系
目的：探讨绝经后妇女血清组织金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与骨密度(BMD)及骨转换生化指标之间的关系。
方法：用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)测定297名48～80岁女性志愿者的血清TIMP-1、MMP-1、MMP-2、血清骨碱性磷酸酶(serumbonealkalinephosphatase，sBAP)、血清骨钙素(serumosteocalcin，sOC)和血清Ⅰ型胶原氨基末端肽(serumCross-linkedN-telopeptidesoftypeⅠcollagen，sNTX)，用双能量X射线吸收测定法(DualEnergyX-rayAbsorptiometry，DXA)测定腰椎正位(anteroposteriorposition，AP)、L1-L4总体、股骨颈、Ward区和总髋部的BMD。
结论：(1)绝经后骨质疏松症妇女骨转换率升高，女性血清MMP-2与BMD及骨转换生化指标(sBAP、sOC、sNTX)相关，(2)血清MMP-2升高可能为高骨代谢转换过程中的一种生化表现。因此，MMP-2可作为一种新的评价骨代谢转换率的指标而应用于临床。
第二部分第一章女性骨密度与年龄、体重指数及血清骨转换生化指标的关系
目的：探讨女性骨密度(BMD)与年龄、体重指数(BMI)及血清骨转换生化指标-血清骨碱性磷酸酶(serumbonealkalinephosphatase，sBAP)、血清骨钙素(serumosteocalcin，sOC)和血清Ⅰ型胶原氨基末端肽(serumCross-linkedN-telopeptidesoftypeⅠcollagen，sNTX)的关系。
方法：用ELISA测定591名20～80岁女性志愿者的血清BAP、OC和NTX。用DXA测定腰椎正位(anteroposteriorposition，AP)L1-L4总体、股骨颈、Ward区、总髋部的BMD。
结论：(1)妇女绝经后骨转换率增加是发生骨质疏松症的主要原因。(2)年龄、BMI、骨转换生化指标sBAP、sOC和sNTX是BMD的影响因素。(3)sBAP、sOC、sNTX均为较好的BMD预测指标。
第二章脂联素对人成骨细胞增殖和分化的作用机制研究
目的：脂联素(Adiponectin)是脂肪细胞特异性分泌的细胞因子，近期的研究发现成骨细胞上有脂联素受体(Adiponectinreceptor，AdipoR)的表达，但Adiponectin对成骨细胞的作用机制尚未明确。本研究首次探讨Adiponectin对人成骨细胞(HOB)分化及增殖的作用及其机制。
方法：逆转录酶PCR及免疫印迹检测体外培养成骨细胞的AdipoR表达。用3H-掺入法检测成骨细胞增殖。ALP用ELISA检测；OC用放射免疫测定法测定；并观测Adiponectin对矿化的影响。p-JNK，JNK，p-p38，p38，p-ERK1/2及ERK1/2用WesternBlot检测。用siRNAs(SmallinterferingRNAs)抑制AdipoR1表达，联合MAPK信号转导阻断剂U0126，SB203580和SP600125干预，以观察Adiponectin对成骨细胞分化及增殖作用的变化及信号转导。
结论：Adiponectin通过AdipoR1/JNK、AdipoR1/P38信号转导途径诱导人成骨细胞的增殖及分化。
第三章脂联素对人成骨细胞组织金属蛋白酶抑制因子-1表达的作用
目的：在证明高表达的TIMP-1抑制MBA-1细胞凋亡以及Adiponectin诱导人成骨细胞的分化与增殖的基础上，进一步探讨Adiponectin对成骨细胞组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)表达的作用。
方法：用WesternBlot检测细胞TIMP-1蛋白的表达。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养液的TIMP-1浓度。
结论：Adiponectin对成骨细胞TIMP-1的作用是其调节骨代谢又一新机制。