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植物内生真菌是寄宿在高等植物的一类微生物,是开发具有医药、农业或工业应用价值的新型次生代谢产物的重要来源。从药用植物内生真菌寻找高生物活性、新化学结构和(或)宿主植物特有的活性成分,相关研究备受关注。本论文对F127(Phomopsis sp. 进行了深入研究,这是课题组前期从海南粗榧内生真菌筛选得到的一株高抗菌、抗肿瘤活性菌株。基于生物活性评价,以最适发酵方式对菌株进行发酵,依次对发酵粗提物、粗提物各粗分段进行不断分离、纯化,以期解析其次级代谢产物中高活性化合物的结构、以及寻找可能的新活性或新结构化合物。本研究首先以固态和液态不同方式分别对该菌株进行发酵,通过代谢产物产量、化学成分谱及抗菌抗肿瘤活性的比较,确定了以大米基质对F127菌株进行大规模固态发酵培养;其次着重测试了大米固态发酵粗提物的化学成分谱、抗肿瘤活性,同时也测试了其抗氧化活性和抗菌活性;再对大米固态发酵粗提物进行分离纯化,追踪了粗提物粗分段的生物活性,并进一步分离活性粗分段,通过核磁共振分析,鉴定了 10个单体化合物的化学结,最后评价了这些单体化合物的抗肿瘤活性、抗菌活性和抗氧化活性。主要研究结果如下:(1)以不同培养基质、经不同培养方式对F127菌株分别进行发酵,发现大米基质的固态发酵代谢产物产量最高、化学成分谱最丰富、还呈现出更好的抗菌活性和更强的白血病细胞毒活性。因此,选取大米固态发酵对F127菌株进行扩大培养。(2) 15.0kg大米基质,经固态发酵,乙酸乙酯萃取,再减压浓缩得粗提物浸膏(520.5g)。试管定性试验发现大米固态发酵粗提物包含酚类、生物碱、黄酮类、皂苷类、甾体类、蒽醌类及挥发油类七大类物质,说明其代谢产物种类丰富。该粗提物对K562、NB4和HL-60均呈现出强细胞毒活性,IC50分别达到1.92μg /mL、10.29μ /mL和17.12μg/mL。以七株指示菌进行抗菌活性测试,结果表明其粗提物对五株指示菌(Escherichia coli,Bacillussubtis, Streptococcus agalactiae, Sclerotinia sclerotiorum, Fusarium oxysporum f.sp. Cubense)抑制作用显著。在抗氧化活性测试中,粗提物总酚、总黄酮含量也较高,分别达到51.54mg/g、21.39mg/g; 1mg/mL浓度下,其总还原力大小、ABTS·清除率、DPPH·清除率分别为0.642、90.42%、85.32%,表明粗提物还具有良好抗氧化活性。(3)以柱色谱分离大米固态发酵粗提物得粗分段F1-F6,对活性粗分段F2、F3、F4采用柱色谱、反相柱色谱、薄层色谱、高效液相色谱等技术进一步分离,最终得到10个单体化合物,再使用NMR波谱技术,依次鉴定为:麦角甾醇(1),oblongolide S (2),对羟基苯甲醛(3),(R)-6-Hydroxymellein (4),phomopsolidone B (5), oblongolide A1 (6), phomopsolide B (7), oblongolide B1 (8), oblongolide T (9),penixanacidA (10)。其中化合物(6)和化合物(8)为未经报道的新化合物;化合物(10)属于氧杂蒽酮类化合物,且该化合物为首次从Phomopsis内生真菌中分离得到;化合物中含有4个oblongolide类物质,这是Phomopsis内生真菌一类常见且研究活跃的代谢物质。(4)以MTT法、MIC法、DPPH法对10个单体化合物分别做了体外抗肿瘤、抗菌、抗氧化活性评价。结果发现新化合物oblongolide A1具有一定抗氧化活性(IC50=386.61μg/mL),还对Staphylococcu aureus具有较好抑制作用(MIC=62.5μg/mL);新化合物 oblongolide B1则对Staphylococcu ureus和Escherics coli均呈现出较强抗性,MIC值均为62.5μg/mL,且该化合物还对K562、NB4、HL-60呈现良好细胞毒活性,对HL-60细胞,IC50到达31.03μg/mL。此外,除oblongolide S未表现出实际生物活性,其余9个物质均表现出一种或多种生物活性:对羟基苯甲醛,(R)-6-Hydroxymellein表现出较好抗氧化活性(IC50=70.96μg/mL,104.01μg/mL);麦角甾醇,phomopsolidone B,penixanacid A对罗非鱼源无乳链球菌抑制作用显著(MIC=1.95μg/mL, 7.81μg/mL, 3.9lμg/mL);麦角甾醇,phomopsolide B, penixanacid A对K562、NB4、HL-60均有较强细胞毒活性,且phomopsolide B 的细胞毒活性最强(IC50=7.62μg/mL, 1.44μg/mL, 2.78μg/mL)。上述结果表明,拟茎点霉F127菌株的次级代谢产物种类丰富,活性多样,部分产物生物活性作用较高,还含有新结构化合物,值得对其做进一步深入研究,最终为开发海南粗榧内生真菌潜在药效资源提供科学依据。