DCC基因对裸鼠结直肠肿瘤模型影响的实验研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huiyuanai852
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目的:结直肠癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤,近年来发病率不断提升,严重威胁人类健康,本文通过构建结直肠癌裸鼠动物模型,探究DCC基因是否能够抑制肿瘤生长和淋巴管生成,进而研究DCC基因与结直肠癌之间的关系,以期找到结直肠癌的临床治疗新途径。  方法:将通过PCR获得的目的片段连同载体一并转化到大肠杆菌中,构建pUC57-DCC质粒,再通过酶切、连接的方法构建并鉴定pCDNA3.1(+)-DCC重组质粒。将制备好的人结直肠癌SW1116细胞悬液注射到裸鼠腋下稍上部位皮下,2×106/只,制备荷瘤裸鼠模型,每周两次观察裸鼠状态和肿瘤生长情况。建模第15天,观察裸鼠成瘤情况,并将荷瘤裸鼠随机分为生理盐水组,DCC干预治疗组,5-FU阳性对照组,每组各5只,生理盐水组给予腹腔注射生理盐水;DCC干预治疗组给予瘤体内多点注射DCC质粒,注射50μg,质粒浓度908ng/μL;5-FU阳性对照组给予腹腔注射5-FU,20mg/kg体重,连续15天。每天观察各组荷瘤裸鼠的情况,测量荷瘤裸鼠体重;由于给药后第15天瘤体无明显差异,因此多饲养1周并于给药后第22天取样检测,剥离瘤子并称重拍照,计算抑瘤率。通过HE染色及免疫组织化学法对淋巴管生成密度及DCC蛋白表达量进行观察。  结果:①在生活质量方面:观察发现DCC组的裸鼠较5-FU组的裸鼠精神状态佳,进食量及活动量大。②DCC组和5-FU组在裸鼠成瘤后第22天的肿瘤体积和肿瘤重量都明显低于生理盐水组,其差异具有显著的统计学意义(P<0.05),但两组间对比没有明显差异(P>0.05)。据统计,DCC组和5-FU组两组之间的抑瘤率没有明显差异(P>0.05),但DCC组裸鼠体重无明显变化,而5-FU组裸鼠明显消瘦,两组之间对比有明显差异(P<0.05)。③在HE染色中,淋巴管大多分布于肿瘤边缘区,DCC组和5-FU组淋巴管密度低于生理盐水组,DCC组和5-FU组分别与生理盐水组对比有统计学差异(P<0.05),而DCC组和5-FU组两组之间比较没有明显差异(P>0.05)。④在免疫组化染色中,生理盐水组中DCC蛋白呈微弱表达,而在DCC组和5-FU组两组中表达量高,DCC组和5-FU组分别与生理盐水组对比差异显著(P<0.05),而DCC组和5-FU组两组之间比较没有明显差异(P>0.05)。  结论:(1)DCC基因能有效地抑制荷瘤裸鼠皮下肿瘤的生长,其效果与5-FU组无明显差异。(2)DCC基因能明显抑制荷瘤裸鼠淋巴管的生成,从而抑制结直肠癌的远处转移,其效果与5-FU组无明显差异。(3)DCC基因治疗可改善荷瘤裸鼠的生活质量,较化疗药5-FU组对裸鼠的毒副作用低。
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