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食管癌是最常见的恶性肿瘤之一,它严重威胁着人类的生命和健康。食管癌的高发地区主要在我国的河南等省份,以往的消化道肿瘤死亡回顾调查显示,每年因食管癌而死亡的人数大约有20万人,位居第4位。引起其死亡的重要原因之一就是浸润和远处转移,因此寻找抑制食管癌浸润转移机制,是目前肿瘤学研究的热点课题之一肿瘤的发生发展是多步骤、多阶段、多因素和多基因参与的过程。恶性肿瘤增殖失控、侵袭和转移的基础是肿瘤转移相关基因的活化和肿瘤转移抑制基因的失活,KiSS-1及MMPs等的突变和缺失与多数恶性肿瘤的发生密切相关。KiSS-1是1996年克隆出的一个肿瘤转移抑制基因。研究证明,KiSS-1的表达缺失与多种恶性肿瘤的浸润转移有关。近年来,已有相关文献报道了KiSS-1与多种恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关,如乳癌、胃癌、卵巢癌和胰腺癌等。该基因表达的降低与缺失与肿瘤的浸润深度及淋巴结转移密切相关,其作用机制可能与抑制基质金属蛋白酶(matrix metalloproteniases, MMPs)的活性及肿瘤细胞的移行能力有关。MMPs是一种能降解细胞外基质的所有成分的锌离子依赖性内肽酶,MMPs中降解基底膜最重要的蛋白酶之一是基质金属蛋白酶-2 (matrix metalloproteinase-2, MMP-2),又称明胶酶A,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅷ及Ⅹ型胶原和弹性纤维,从而降解细胞外基质及促进肿瘤新生血管的生成。研究表明,MMP-2在胃癌及肺癌等多种恶性肿瘤的浸润转移中扮演着重要角色。KiSS-1和MMP-2可能通过调控肿瘤血管的生成而调节肿瘤生长、侵袭和转移。新生血管的形成在实体肿瘤的生长转移中起重要作用,研究其血管改变具有重要的临床意义。目前恶性肿瘤血管生成的数量通过测定微血管密度(microvessel density, MVD)进行评估。迄今为止,有关在食管鳞癌中KiSS-1、MMP-2及MVD的表达及其三者与食管鳞癌浸润转移关系的研究,除本课题组前期发表的相关文章外,国内外尚未见其他文献报道。为深入探讨KiSS-1、MMP-2基因及MVD与食管鳞癌发生发展和浸润转移的关系,寻求检测食管鳞癌发生发展和浸润转移的早期指标,进而寻找可能抑制食管鳞癌发生发展和浸润转移的有效方法。本研究采用免疫组化SP法检测了62例食管鳞癌、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中KiSS-1及MMP-2蛋白的表达水平并探讨了其临床病理意义；同时用抗CD34抗体检测了62例食管鳞癌组织中的MVD,探讨KiSS-1、MMP-2及MVD的相关性,揭示KiSS-1及MMP-2与食管鳞癌浸润、转移的关系。从而为进一步探讨食管鳞癌发生发展、浸润转移机制及寻找抑制食管鳞癌发生发展的可能途径提供理论基础。1.采用免疫组织化学SP法检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中KiSS-1蛋白的表达情况,并探讨其临床病理学意义。2.采用免疫组织化学SP法检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中MMP-2蛋白的表达情况,并探讨其临床病理学意义；3.采用免疫组织化学的方法检测62例食管鳞癌组织CD34蛋白表达情况,探讨MVD分布的临床病理学意义。4.通过检测KiSS-1、MMP-2与CD34蛋白的表达,探讨KiSS-1、MMP-2和MVD分布的相关性及其意义。5.统计学处理：应用SPSS10.0软件处理,采用x2检验、t检验和方差分析,检验水准α=0.05。1.正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中KiSS-1蛋白的表达率分别是90.3%(56/62)、67.7%(21/31)及56.5%(35/62),差异有统计学意义(P<0.001)；浸润深度达浅肌层者及深肌层者KiSS-1蛋白的阳性表达率分别为100%(7/7)和50.9%(28/55),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；KiSS-1蛋白在伴淋巴结转移癌组织中的阳性表达率为35.0%(7/20),明显低于无淋巴结转移癌组织66.7%(28/42)；组织学分级为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的食管鳞癌组织中KiSS-1蛋白的阳性表达率分别为66.7%(10/15)、56.0%(14/25)、50.0%(11/22),差异无统计学意义(P>0.05)。2.正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中MMP-2蛋白的表达率分别是22.6%(14/62)、54.8%(17/31)及71.0%(44/62),差异有统计学意义(P<0.05)；组织学分级为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的食管鳞癌组织中MMP-2蛋白的阳性表达率分别为46.7%(7/15)、72.0%(18/25)、86.4%(19/22),差异有统计学意义(P<0.05)；浅肌层浸润组及深肌层浸润癌组织中MMP-2蛋白的阳性表达率分别为28.6%(2/7)和76.4%(42/55),且差异有统计学意义(P<0.05)；MMP-2蛋白在伴淋巴结转移癌组织中的阳性表达率为90.0%(18/20),明显高于无淋巴结转移癌组织61.9%(26/42)。3.62例食管鳞癌组织中平均MVD值为39.4±9.5,其中浸润深度达浅肌层者及深肌层者的MVD值分别为28.1±8.1及40.8±9.1,差异有统计学意义(P<0.05)；组织学分级为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的食管鳞癌组织中平均MVD值分别为32.3±4.9、38.6±8.3、45.1±10.6,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；伴淋巴结转移的食管鳞癌组织的MVD值为51.2±6.1,明显高于无淋巴结转移癌组织的MVD值33.8±5.0(P<0.05)。4.食管鳞癌组织中的KiSS-1及MMP-2蛋白表达呈负相关关系(rs=-0.418,P<0.05)；KiSS-1蛋白表达阴性病例的MVD值为47.8±7.8,比表达阳性病例的MVD值32.9±5.0显著增高(P<0.05)；MMP-2蛋白表达阳性者的MVD值41.0±3.2明显高于MMP-2蛋白表达阴性者的MVD值36.3±3.8。1. KISS-1蛋白在正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中的阳性表达率依次降低,并与食管鳞癌的浸润深度及淋巴结转移密切相关,提不KiSS-1的表达缺失或降低可能与食管鳞癌的发生发展及浸润转移密切相关。2.MMP-2蛋白的阳性表达率在正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中显著增高,并与食管鳞癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移密切相关。提示MMP-2可能参与了食管鳞癌的发生发展及浸润转移的过程。3.食管鳞癌组织中的MVD值与肿瘤的组织学分级、浸润深度及淋巴结转移相关,提示：MVD与肿瘤的生物学行为密切相关,可作为肿瘤预后判断的一项指标,为进一步通过阻断肿瘤微血管生成而治疗肿瘤提供了理论基础。4.食管鳞癌组织中KiSS-1蛋白表达阴性者MVD值显著高于阳性者,而MMP-2蛋白的表达阳性的MVD值显著高于表达阴性者,且KiSS-1与MMP-2蛋白的表达呈负相关。提示：联合检测KiSS-1、MMP-2及MVD,有望成为判断食管鳞癌患者预后的指标,为进一步研究抑制肿瘤复发转移的可能途径提供了理论依据。