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猪圆环病毒2型及其相关性疫病已成为危害养猪业的主要疫病之一,疫苗是防控PCV2的有效工具之一,但目前商品化疫苗存在诸如有效抗原含量低、免疫应激大等弱点,因此开发具有抗原含量高、纯度高、应激小、免疫剂量少等优势的PCV2疫苗,是今后的研究热点之一。本研究旨在利用细胞悬浮培养技术、抗原纯化技术和灭活冻干技术,研究PCV2-ZJ/C株的规模化培养工艺、抗原高效纯化工艺,并在此基础上,研制了PCV2冻干灭活疫苗,为PCV2冻干灭活疫苗的研究与临床应用提供参考。PCV2 ZJ/C株微载体悬浮培养工艺研究：采用有限稀释法对PK15细胞在微载体上进行驯化培养PK15细胞,获得了微载体培养适应性PK15细胞克隆株(命名为PK-15-S株),在此基础上,利用微载体生物反应器研究PK1 5细胞悬浮培养参数和PCV2-ZJ/C株的悬浮培养参数。结果表明,PCV2-ZJ/C株病毒滴度为108.3-108.5TCID50/mL,相当于传统转瓶培养工艺的6.3-10倍。PCV2 ZJ/C株悬浮培养病毒液的纯化工艺研究：采用澄清、浓缩、层析纯化等技术组合,对病毒滴度为108.3-108.5TCID50/mL的悬浮培养病毒液进行纯化,获得高纯度的病毒蛋白,并按照中华人民共和国农业部第1893号公告中的猪圆环病毒2型灭活疫苗(ZJ/C株)的质量标准进行免疫效力检验,结果表明,当纯化抗原的总蛋白浓度为20有效PCV2蛋白浓度0.34μg/mL时,免疫保护率在80%以上。PCV2冻干灭活疫苗的制备：采用冻干技术和抗原耐热保护技术,设计10种耐热保护剂(B1-10)和3种冻干曲线,优化冻干曲线和耐热保护剂,批量生产了3批疫苗。按照现有冻干疫苗的质量标准和农业部第1893号公告中的猪圆环病毒2型灭活疫苗(ZJ/C株)的质量标准进行耐热稳定性、免疫效力和保存期研究,结果表明,3批PCV2冻干灭活苗的各项指标均符合规程要求；37℃条件下保存14天,2-8℃保存期至少18个月,具备良好的临床应用前景。