【摘 要】
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三七是一种历史悠久的药用植物,其中次级代谢产物三七总皂苷是三七的主要活性成分,它具有活血化瘀,通络活脉以及抑制血小板聚集和增加心脑血流量的作用。鲨烯合成酶基因（SQS）是三七总皂苷合成途径中比较关键的酶,它能催化法尼基焦磷酸合成角鲨烯,而角鲨烯是合成三七总皂苷的必需底物。本研究中,我们首先鉴定出了 9个PnSQS基因,并利用基因结构、保守基序及其蛋白理化性质和蛋白结构等生物信息学手段对三七SQS基
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三七是一种历史悠久的药用植物,其中次级代谢产物三七总皂苷是三七的主要活性成分,它具有活血化瘀,通络活脉以及抑制血小板聚集和增加心脑血流量的作用。鲨烯合成酶基因（SQS）是三七总皂苷合成途径中比较关键的酶,它能催化法尼基焦磷酸合成角鲨烯,而角鲨烯是合成三七总皂苷的必需底物。本研究中,我们首先鉴定出了 9个PnSQS基因,并利用基因结构、保守基序及其蛋白理化性质和蛋白结构等生物信息学手段对三七SQS基因家族成员进行了详细地分析,在此基础上对三七SQS基因家族在不同组织中以及ABA、MeJA和SA激素诱导处理下的表达模式进行分析,根据实验结果筛选出PnSQS5/-7/-8这三个基因。随后从三七中克隆出PnSQS5/-7/-8,并对其进行亚细胞定位分析、蛋白表达纯化实验。获得以下主要结果:1.除PnSQS8外其余基因可能是通过基因复制而来的平行同源基因。在进化过程中PnSQS5和PnSQS 8出现了内含子缺失的情况,且三七SQS基因家族成员序列相似性高的基因有相似或者相同的保守基序。2.三七SQS蛋白二级结构主要以α-螺旋为主,其次是无规则卷曲,排在第三位的是延伸链,最少的是β-转角,三级结构预测结果显示三七SQS基因蛋白三级结构模型有可能趋于真实的蛋白质结构。3.组织表达模式和激素诱导表达模式显示PnSQS5/-7/-8在叶组织中表达量较高,且在ABA、MeJA和SA处理后表达量均显著升高。4.亚细胞定位显示PnSQS5/-7/-8均定位于细胞膜和细胞核。5.通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表达并纯化获得了PnSQS5/-7/-8蛋白。
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