Iloprost对猪早期胚胎体外发育的影响

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随着各品系克隆猪相继出生,转基因克隆技术作为猪育种的重要手段应用日趋广泛。但是猪胚胎的体外培养体系目前仍不完善,体外发育的囊胚比例和质量明显较低,不完善的胚胎体外培养体系是克隆与转基因猪生产效率低下,限制猪体外胚胎应用的因素之一。通过外源添加体内因子改善体外胚胎培养体系是有望改善猪体外胚胎发育质量培养体系。PGI2是前列腺素家族一员,存在于输卵管子宫环境中,在早期胚胎发育过程中起到重要的调控作用。本研究应用了PGI2类似物iloprost,探讨PGI2对猪胚胎发育的影响。实验以体外受精(IVF)胚胎为研究对象,分别在不同时期(0h、24h、48h、72h)以不同浓度(0μM、0.2μM、0.5μM、1μM、2μM、5μM、10μM)将iloprost加入到猪体外胚胎培养液中,于156h时记录囊胚发育率和囊胚细胞数,筛选获得最佳添加方法,检测胚胎脂肪代谢速度和代谢相关基因(cox2、creb,pparδ、pdk、cpt2)表达水平,解析iloprost影响胚胎发育的机制。实验取得以下结果1)以1μM浓度分别于不同时期加入iloprost,结果显示受精后48小时加入iloprost后,囊胚发育率和囊胚细胞数明显大于其他组。2)于受精后48小时,分别以不同浓度加入iloprost,结果显示加入2μM iloprost后,囊胚发育率和囊胚细胞数明显大于其他组。iloprost最佳的添加方法为,在受精后48h加入2μM,胚胎囊胚发育率(28%)和囊胚细胞数(49.42)显著(P<0.05)高于对照组的囊胚发育率(16%)和囊胚细胞数(28.22)3)以2μM浓度于培养后48小时加入iloprost,结果显示孤雌胚胎、体外受精胚胎、核移植胚胎之间发育改善程度不存在显著差异。4)应用油红O染色,检测PGI2对胚胎中脂肪酸含量的影响,结果显示添加iloprost后,胚胎脂肪酸降解速度(实验组6.63×104vs对照组8.96×104)也显著(p<0.05)加快。5)检测加入iloprost对能量代谢相关基因(cox2、creb,pparδ、pdk、cpt2)表达量的影响,结果显示脂肪酸代谢相关基因(cox2、creb,pparδ、pdk)表达量显著升高,糖代谢相关基因(cpt2)表达量无显著变化。结果表明,PGI2可以通过促进胚胎中脂肪酸的降解,为胚胎发育提供能量,显著提高胚胎体外发育能力。
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