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黑曲霉Y-61是北京市农林科学院植物保护和环境保护研究所筛选的一株线虫生防菌株,其代谢产物对植物根结线虫具有很强的毒杀能力。本文对该菌株发酵液对根结线虫的作用、活性物质的理化性质、分离纯化、结构鉴定及活性物质之间的相互关系等方面进行了系统研究。结果如下:1、Y-61菌株发酵滤液处理根结线虫7d后,对分散卵和卵囊孵化抑制率分别为67.38%和95.96%;用浓缩5倍的发酵滤液处理线虫7d后,对分散卵和卵囊孵化抑制率分别为82.11%和98.47%;发酵滤液处理二龄幼虫10min后,对二龄幼虫的击倒率为74.08%,处理12h后,校正死亡率达97.25%。2、Y-61菌株发酵液中杀线虫活性物质具有良好的热稳定性和酸碱稳定性,60℃处理2h对杀线活性无影响;活性物质的pH耐受范围为2.0～9.0,在此范围内杀线活性稳定性较强,pH1.0或pH10.0时发酵液活性降低,与阳性对照差异显著;活性物质能耐受紫外线照射,发酵液经紫外光照射10h后对线虫的致死率保持在95%以上。3、明确了Y-61菌株产生的杀线虫活性物质分离和纯化步骤。发酵液用大孔树脂吸附预处理后,以乙酸乙酯、乙酸乙酯和甲醇、甲醇为洗脱剂,通过硅胶柱层析得到粗提物,粗提物浓缩后,以乙醇为洗脱剂,通过Sephadex LH-20柱层析,获得两个活性组分。4、活性物质结构鉴定结果表明,有机质谱分析测定两个杀线虫活性组分的分子量分别为90 Da和192 Da。红外扫描(1000～4000 cm-1)图谱中,活性组分Ⅰ为单一的-COOH吸收峰,活性组分Ⅱ结构式中含有-COOH、-OH、-CH2、-C=O等结构。基于红外扫描、核磁共振1H和13C图谱分析结果,活性组分Ⅰ和Ⅱ的分子式分别为C2H2O4和C6H8NO7。结构分析表明,C6H8NO7和C2H2O4分别为草酸和柠檬酸。5、用两因素重复设计的方差分析法和等高线图解分析法,测定了草酸和柠檬酸对根结线虫作用的联合毒力。根据草酸和柠檬酸的LC50可以求得柠檬酸和草酸1:1混合物理论值LC50,add为0.1468 g/L,试验值LC50,mix为0.09738 g/L,LC50,add > LC50,mix,即柠檬酸和草酸具有协同作用。两种活性物质不同比例混合所得的LC50,mix与相应理论的LC50add进行Student t test统计分析,柠檬酸和草酸不同比例混合对根结线虫作用之间有显著差异。结果表明,草酸与柠檬酸在作用于根结线虫过程中,存在非常显著的交互作用,表现为协同效应。