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本论文以黄海潮间带的繁茂膜海绵和肾指海绵为实验材料,对海绵中活性蛋白质提取工艺的优选、分离纯化、理化性质及生物活性等方面进行了研究。 在确立了考马斯亮蓝法正确检测蛋白质含量的基础上,经过比较后摸索出蛋白质最佳提取溶剂、硫酸铵沉降最佳饱和度、合适的浓缩方法等工艺,以期从海绵中获得蛋白质。 选择两种提取体系同时分离纯化,并对所获得的蛋白质活性进行对比研究。“体系Ⅰ”是以常规的水溶液作为提取溶剂;“体系Ⅱ”是以pH7.5、50mM的PBS缓冲液为提取溶剂。 繁茂膜海绵中得到的粗蛋白经过Sephadex G-100凝胶层析和DEAE-纤维素层析后分离得到三个主要的均一蛋白HⅠ-1,HⅡ-1,HⅡ-2,经PAGE电泳鉴定它们均达到电泳纯。三个组分HⅠ-1,HⅡ-1,HⅡ-2的分子量分别为23 kDa、52 kDa和57 kDa,经SDS-PAGE电泳鉴定HⅠ-1蛋白只含一个亚基;HⅡ-1蛋白和HⅡ-2蛋白各含有两个亚基。酚-硫酸法检测它们糖含量后,发现HⅠ-1和HⅡ-1为糖蛋白,它们糖含量分别为36.1%、21.5%,而HⅡ-2不含糖。从肾指海绵中纯化得到的蛋白组分由于蛋白含量较少,物化性质难以确定。 对HⅠ-1,HⅡ-1,HⅡ-2三种蛋白及纯化得到的其它蛋白进行了体外抗肿瘤活性检测,结果发现“体系Ⅱ”两种海绵中得到的多种蛋白组分都具有显著的抗肿瘤活性,HⅡ-1蛋白对QGY-7701和Raji肿瘤细胞的IC50分别约为28.6μ g/ml、29.9μg/ml。HⅡ-1蛋白质活性在pH5~7.5范围内相对稳定,在室温活性完全丧失,但在高温具有较高的热稳定性。HⅡ-2和从肾指海绵中得到的蛋白组分具有弱的抗肿瘤活性。而“体系Ⅰ”中得到的HⅠ-1蛋白未表现出明显的抗肿瘤活性,但具有显著的促进繁茂膜海绵细胞粘附成团的生理活性。