锦灯笼果实多糖的分离纯化及结构分析

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锦灯笼(Physalis alkekengi L.var.franchetii),酸浆属植物,别名红姑娘,主产于黑吉辽三省。在民间的使用历史悠久,可以入药又可生食。已有研究表明,锦灯笼果实多糖具有抑菌消炎、抗肿瘤、缓解糖尿病病症等功效,而对锦灯笼果实多糖的成分详细分析较少。本文对锦灯笼果实多糖进行了系统的分离纯化,并分析了主要锦灯笼果实多糖的结构,为其后续构效关系的研究提供理论支持。具体研究方面如下。以市售的锦灯笼果实为原料,去除宿萼后将果实碾碎沸水提取三次,经终浓度为75%乙醇沉淀,干燥后得到锦灯笼果实粗多糖PPS。PPS的糖含量为39.95%、蛋白含量为5.59%、糖醛酸含量为36.98%。将PPS反复冻融去除不溶物后用30%、50%和70%终浓度乙醇分级得到PPSB-1、PPSB-2和PPSB-3,其中收率由多至少的顺序为PPSB-1、PPSB-3、PPSB-2。利用DEAE-纤维素和Sephrose CL-6B凝胶柱层析对PPSB-1、PPSB-2和PPSB-3进行分离纯化,共分离出10种单一组分多糖,分别为PPSB-1N1、PPSB-1Ab1、PPSB-1Ab2;PPSB-2N1、PPSB-2Ab1;PPSB-3N1、PPSB-3N2、PPSB-3Aa1、PPSB-3Ab1、PPSB-3Ab2,可见PPSB-3中酸性多糖种类较多。由于PPSB-1Ab1、PPSB-2N1和PPSB-3N2得率较低,仅对其他七种组分进行分子量及均一性分析。结果表明中性糖分子量均低于酸性糖,其中中性糖PPSB-1N1和PPSB-3N1均小于10.00 kDa,酸性糖PPSB-1Ab2、PPSB-2Ab1、PPSB-3Aa1、PPSB-3Ab1、PPSB-3Ab2分子量为16.00~830.00 kDa。且各组分中,酸性糖的回收率要高于中性糖,是主要组分。高效液相色谱法检测锦灯笼果实多糖中单糖的种类和比例。结果表明锦灯笼果实中性多糖PPSB-1N1和PPSB-3N1的主要组成单糖是Gal、Xyl和Ara,其中Gal是主要成分,高达70%以上。锦灯笼果实酸性多糖主要由GalA、Gal、Ara或Xyl组成,不同酸性多糖其比例有所不同,其中由PPSB-1分离纯化的PPSB-1Ab2的GalA含量最高(57.33%);由PPSB-2分离纯化的PPSB-2Ab1的GalA含量为34.85%;由PPSB-3分离纯化得到三个组分PPSB-3Aa1、PPSB-3Ab1和PPSB-3Ab2,其GalA含量依次为14.51%、29.05%、38.53%,可见GalA含量变化幅度较大。PPSB-1Ab2、PPSB-2Ab1和PPSB-3N1进行甲基化后经GC-MS检测,并对其主要糖苷键类型进行分析。实验结果表明酸性糖PPSB-1Ab2和PPSB-2Ab1中GalA均以1,4-GalAp形式存在,在O-3位置上有分支,且都含有Gal末端。不同的是PPSB-1Ab2中Gal以1,6-Galp形式存在,在O-4位置上有分支,Xyl以1,4-Xylp形式存在,在O-2位置上有分支,且含有Xyl末端;PPSB-2Ab1中Gal以1,4-Galp形式存在,在O-3和O-6位置上有分支,Xyl以1,2-Xylp形式存在,在O-4位置上有分支。中性糖PPSB-3N1是1,4-Galp为主要结构,在O-6位置上有分支,且Ara以1,5-Araf形式存在并在O-3位置上有分支,以Gal、Ara和Xyl为末端。未来将进一步对其生物学活性进行研究,以探讨其构效关系。
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