产氨基葡萄糖工程菌的构建与发酵条件优化

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氨基葡萄糖(GlcN)又被称为氨基葡糖或者葡糖胺,它是葡萄糖2号位C上羟基被氨基取代后的化合物,在很多领域具有广泛的应用,尤其是在医药领域和保健领域。氨基葡萄糖传统生产方法主要采取酸解几丁质法,受原料限制产量低,污染比较严重,并且不适合个别过敏人群。采用微生物发酵法替代酸解法是目前研究的热点。本文介绍一种构建基因工程菌产氨基葡萄糖的方法,通过大肠杆菌中产氨基葡萄糖的代谢途径分析,找到了代谢途径中的两个关键酶氨基葡萄糖合酶和氨基葡萄糖乙酰化酶,通过将枯草芽孢杆菌中的氨基葡萄糖合成酶基因(Glms)和酿酒酵母中的氨基葡萄糖乙酰化基因(gnaI)基因,共同导入到大肠杆菌中,让其在大肠杆菌中的高效表达生产氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖,乙酰氨基葡萄糖经过弱酸处理得到氨基葡萄糖。构建好的基因工程菌和原始菌对比,氨基葡萄糖合成酶蛋白和乙酰化酶蛋白表达量有了明显的提高。通过摇瓶发酵优化,重组菌的胞内和胞外氨基葡萄糖在16h时达到最高值,分别为0.637g/L和4.585g/L;对照菌为0.235g/L和0.562g/L。重组菌中氨基葡萄糖的总含量为5.222g/L,对照菌为0.797g/L。通过发酵罐发酵,氨基葡萄糖的总产量达到了7.992g/L,乙酰氨基葡萄糖的总产量达到了3.501g/L,和对照菌相比氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖的总产量有了明显提高。这对于氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖的发酵具有指导性的意义。
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