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心脏是哺乳动物的胚胎发育过程中最早出现的重要器官之一,它的正常发育包括多个步骤,首先从未成熟的中胚层细胞分化成心脏中胚层细胞,接着再由心脏中胚层细胞发育成心肌细胞。因此研究心肌细胞的具体分化机制对治疗心脏相关疾病和其他心肌相关疾病具有十分重要的意义。在心脏发育的过程中,Wnt分子及其受体表现出不同的时空表达特性,这表明Wnt信号在早期心脏发育过程中具有十分重要的作用。Wnt基因在胚胎发育的早期就开始表达,Wnt蛋白调节不同的细胞生命过程,例如基因转录、细胞的增殖、成熟、极性和分化。本实验室之前的研究结果表明Nulp1可以通过调节Wnt信号通路的活性来抑制P19细胞向心肌细胞的分化过程。因此,本文利用了DMSO体外诱导P19细胞来模拟心肌分化模型,进一步探究Nulp1与Wnt信号通路的关系。首先进行了免疫荧光实验,检测Nulp1基因对心肌细胞分化的影响,结果发现Nulp1对P19细胞的心肌分化起到抑制的作用。接着进行了Western blot实验,检测Nulp1基因在心肌分化过程中的蛋白表达量变化,结果发现Nulp1在心肌分化的过程中的表达随着时间的推移呈现出动态变化的状态。通过查阅相关文献,筛选出Wnt10b、Wnt11、APC、LEF1和LRP5五个Wnt信号通路相关基因,接着进行RT-PCR实验检测Nulp1基因的表达变化对以上五个基因表达水平的影响,结果发现APC的表达受到Nulp1表达变化的影响,提示Nulp1可能通过调节APC的表达,影响Wnt信号通路的活性,进而调节P19细胞的心肌分化过程,对进一步探究Wnt信号通路对Nulp1的具体调节机制具有借鉴意义。另外,本文也进行了其它方面的研究,即探究花旗松素(Tax)通过MAPK/HMGB1信号通路对H9C2细胞的氧化应激保护机制。我们利用H9C2细胞分析了Tax对细胞形态的影响,检测了细胞内活性氧因子、氧化应激相关基因i NOS、OPN和HMGB1的m RNA表达水平,以及丝裂原活化蛋白激酶信号通路成员蛋白p38、JNK、ERK的蛋白及磷酸化表达水平。结果表明,Tax可以改善H2O2对细胞造成的形态学改变并减少细胞内氧化应激水平,激活HMGB1的表达,抑制氧化应激相关基因i NOS和OPN的表达,同时提高细胞内MAPK信号通路相关蛋白的磷酸化水平。