目的:研究去分化人脐带间充质干细胞(De-h MSCs)的基本生物学功能和抗氧化应激生存能力及作用机制,以期进一步拓宽人们对人脐带间充质干细胞(h MSCs)生物学性质的认识,并为这一类MSCs的临床开发利用提供借鉴,具有理论和实际意义。方法:通过组织块贴壁法从新生胎儿的脐带中分离培养出MSCs,利用成脂诱导分化培养基对h MSCs进行短暂的成脂诱导培养后去除诱导条件,换成初始的干细胞培养基培养成为De-h MSCs,并在倒置显微镜下观察所获细胞形态;为了对De-h MSCs的基本生物功能进行鉴定及评价,将实验分为两组:对照组(h MSCs)和实验组(De-h MSCs),通过比较两组细胞的生物学功能,以期发现De-h MSCs的生物学功能优势。具体内容包括:利用CCK-8检测细胞的增殖能力,通过流式细胞术检测细胞的免疫表型,通过油红O和茜素红染色检测细胞向成脂和成骨细胞的分化能力,利用RT-PCR法对细胞的成脂再分化能力进行评价,通过transwell检测细胞的体外迁移能力;为了进一步研究De-h MSCs的抗氧化应激生存能力及作用机制,本实验依次利用CCK-8法确定叔丁基过氧化氢(t-BHP)的作用浓度以建立细胞损伤模型,利用流式细胞术测定细胞的周期分布和细胞凋亡情况,通过Western blot检测与细胞凋亡和自噬相关的通路信号分子,利用激光共聚焦显微镜观察细胞的自噬情况。结果:利用组织块法可在2-3周内从人脐带组织中分离出h MSCs,该方法成功率高、分离效果稳定,所获细胞易于体外扩增,经多次传代后仍保持稳定的MSCs形态特征。h MSCs成脂诱导分化后撤除分化诱导培养基进行初始的干细胞培养成为De-h MSCs,此细胞与h MSCs的形状一致,呈长梭形,形态均一;实验组De-h MSCs的基本生物学功能与对照组h MSCs相比,实验组与对照组一样具有较强的增殖和体外迁移能力,但两者无显著差异。都能高表达基质细胞相关的表面标记CD90、CD73、CD105,不表达造血干细胞表面标记CD34、人类白细胞共同抗原CD45。均具有向成脂、成骨细胞方向分化的能力,同时De-h MSCs再次进行成脂分化的效率明显高于对照组h MSCs(p<0.05);我们也发现,两组细胞用300μM t-BHP处理后,两组细胞的细胞周期均受到阻滞,但实验组对t-BHP引起的细胞周期阻滞的耐受性较强。同时细胞的存活率也受到影响,且对照组的细胞存活率显著低于实验组(p<0.05)。Western blot检测了t-BHP作用前后对照组和实验组内凋亡、自噬等信号通路关键分子的表达变化,发现抗凋亡蛋白分子bcl-2和bcl-x L在实验组中的表达显著高于对照组(p<0.05),自噬分子LC-3B-II在对照组中的表达显著高于实验组(p<0.05),通过激光共聚焦观察发现两组细胞均出现了不同程度的自噬,但对照组发生自噬的程度明显高于实验组,说明去分化所引起的细胞自噬活性的改变也参与了De-h MSCs对t-BHP的耐受。结论:De-h MSCs和h MSCs具有相同的形态特征,且都具有较强的增殖和体外迁移能力,都均一地表达基质细胞相关的表面标记CD90、CD73、CD105,不表达造血干细胞表面标记CD34、人类白细胞共同抗原CD45,并都具有向成脂、成骨细胞方向分化的能力,且进行成脂再分化的效率显著高于h MSCs。上述结果:一方面证实我们原代分离的细胞是MSCs;一方面表明去分化不影响h MSCs的增殖、免疫表型、分化和体外迁移能力,且去分化后具有更强的成脂再分化能力;De-h MSCs在抗凋亡和改变细胞自噬活性的能力上显著优于h MSCs,此能力更是弥补了h MSCs移植体内后存活率低下的问题,有望成为临床再生治疗更具优势的种子细胞,并为De-h MSCs的临床优化应用提供理论依据和实验参考。