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黄芪经非解乳糖链球菌FGM(分离于鸡盲肠内容物)发酵处理后,多糖的提取得率有显著提高,其促生长、修复肝损伤及调节小鼠骨髓源树突状细胞成熟的生物活性也有一定程度的改善,但发酵黄芪多糖(FAPS)对免疫抑制小鼠肠道黏膜免疫的调节作用还未见研究报道。本论文研究了 FGM菌株发酵黄芪后多糖的超声辅助提取工艺和结构表征,分析了发酵黄芪多糖对小鼠肠道黏膜免疫的保护作用,旨在为发酵提取的黄芪多糖进一步开发应用提供理论支持。1.为更高效地利用发酵黄芪提取多糖,采用超声辅助提取法,利用单因素试验、Box-Behnken及Design-Expert软件设计实验,通过响应面法分析得到关于发酵黄芪粗多糖(CFAPS)得率的提取时间、液料比和提取功率的模型方程,各因素对CFAPS得率的影响程度以液料比、提取时间和提取功率依次递减,其中液料比与功率交互作用最为显著。最佳工艺参数为提取温度50℃、提取时间60 min、液料比8 mL/g及提取功率480 W,得率为7.35±0.08%,高于传统的热水浸提法(6.95±0.24%)。结果表明,超声辅助提取法的应用能够在缩短提取时间的同时提高多糖得率。2.为探讨黄芪发酵后多糖的结构表征及抗氧化活性的变化,通过不同的化学方法检测,FAPS的总糖含量(86.34±1.19%)和硫酸基含量(1.36±0.05%)略高于黄芪多糖(APS)的总糖含量(77.33±2.60%)和硫酸基含量(1.19±0.03%),而FAPS的蛋白含量(6.38±0.62%)略低于APS(7.01±0.94%)。两者均无还原糖及酚类。通过高效液相色谱法(HPLC)检测,APS的主要单糖摩尔比为 Glc:Gal:Ara=27.92:5.20:2.86,而 FAPS 的主要单糖摩尔比为 Glc:Gal:Ara=23.45:2.50:3.16。通过高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)检测,FAPS的平均分子量低于APS,尤其是在高分子量区段。通过红外光谱(FT-IR)、原子力显微镜(AFM)及刚果红实验检测,两者均含有吡喃糖和α-糖苷键,FAPS颗粒直径及高度均小于APS,且两者均不含三股螺旋结构。通过抗氧化活性实验检测,FAPS表现出更好的DPPH和羟基自由基清除能力。结果表明,黄芪发酵后多糖的结构表征无明显差异,而抗氧化活性的改善可能与平均分子量下降有关。3.为探讨FAPS对免疫抑制小鼠肠道黏膜免疫的调节作用,采用血常规、组织切片、ELISA、RT-PCR等方法检测,发现连续3d腹腔注射60mg/kg环磷酰胺(CY)可有效建立肠道黏膜免疫抑制模型,连续10 d灌胃400、600 mg/kg FAPS能够恢复体重、免疫器官指数、白细胞数量以及肠组织形态,调节SIgA a-chain和pIgR的基因表达量促进SIgA分泌,增加血清中IgA、IgG、IgM及IL-2、IFN-γ含量,恢复肠道的总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果表明,中、高剂量FAPS能够改善免疫抑制小鼠的肠道黏膜免疫功能。4.为探讨FAPS对免疫抑制小鼠肠道上皮屏障功能的影响,采用RT-PCR、Western blotting及组织免疫荧光检测,发现连续3d腹腔注射60 mg/kg CY能够显著降低小肠组织中紧密连接(TJ)和黏附连接(AJ)相关蛋白的表达,连续10 d灌胃400、600mg/k FAPS能够促进Ecadherin、Occludin、ZO-1、ZO-2、ZO-3、Cingulin 及 Claudin-2 的基因表达,同时能够促进 ZO-1、E-cadherin、Claudin-2及Claudin-7的蛋白表达。结果表明,中、高剂量FAPS具有保护和维持TJ/AJ蛋白表达量和完整性的作用,通过调节肠道上皮细胞屏障功能改善CY造成的肠道黏膜损伤。