自从1969年,在孕妇外周血中发现核型为46,XY的细胞,开始了人们对无创性产前基因诊断的研究.无创性产前基因诊断以孕妇外周血中的胎儿细胞为材料,获取其中含量微少的胎儿细胞,应用胎儿细胞的基因组DNA检测是否存在致病基因,从而实现遗传病产前基因诊断的目的.该研究应用不连续密度梯度离心方法初步富集有核红细胞较三得密度梯度离心操作结合FACS或MACS技术更简便,离心效果好,获取有核红细胞比例高,方法简单、廉价,易于普通医院学习和掌握,便于进行临床推广应用;该研究应用美国Pharmacia公司的Percoll液作为分离介质,Percoll具有密度可调的优点,分离后易于被洗脱,同时还可重复使用,较其它分离介质更适合于应用;PEP是随机扩增单细胞全基因组的有效方法.PEP扩增片段长度估计可达kb,对于一般的STR扩增是足够的.通过该研究,作者们认为应用PEP方法扩增单个细胞全基因组的产物可满足基因诊断的要求.另外,PEP方法对于样品量少的实验和检测(如从石蜡组织或法医从腐尸中提取的DNA)是极为有意义的.该研究联合应用性别和多态性遗传标记(STR)连锁分析鉴定单个细胞的来源,用DMD基因内和3′及5′端的二核苷酸重复多态作为遗传标记,因此在直接检测缺失和非缺失型的DMD基因诊断的同时鉴定单个NRBC的来源.因这几个位点的杂合度高,基本可以满足鉴定的要求,不仅经济节约,避免操作烦琐,也减少了实验步骤,诊断、鉴别同时完成,易于临床推广应用,有重要的社会和经济意义.该研究应用DMD基因内及5′端和3′非翻译区数个位点的(CA)n二核苷酸重复多态作为遗传标记,这几个位点提供的信息量高而且能用PCR方法扩增,是对DMD家系单体型连锁分析的理想位点.该方法直接检测缺失型连锁分析能一步同时完成.该方法直接检测缺失和非缺失型连锁分析能一步同时完成,而且两者联合分析能排除扩增失败所造成的损失假阳性,扩大了基因检测范围,携带者诊断更为准确可靠.结论:通过该研究作者们在国内首次初步建立了DMD高风险胎儿的无创性产前基因诊断新技术,在该室建立了以单个细胞为模板扩增全基因组DNA的PEP方法,同时建立了应用显微操作方法获取孕妇外周血中的单个胎儿细胞的新技术.