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禽大肠杆菌病（Avian colibacillosis）是指由致病性大肠杆菌引起禽类的急性、慢性传染病的总称。禽致病性大肠杆菌（aVian pathogenic Escherichia cDli,APEC）的优势血清型为O1:K1、O2:K1和O78:K80,其毒力因子有:脂多糖复合物、荚膜、黏附素、温度敏感血凝素、铁摄取系统、外膜蛋白、毒素、AGI-3基因组岛、侵袭素、Pst系统等。毒力基因片段E9、F11为禽高致病性大肠杆菌IMT5155株与禽非致病性大肠杆菌CFTO73株通过抑制差减杂交（SSH）获得的其中两片段,本研究对其进行了克隆、序列分析,并对E9片段进行表达及特性分析。1.经BLAST比对,参考已知序列,以PCR扩增禽致病性大肠杆菌IMT5155的基因片段E9、F11所在的阅读框,并将其插入到pMD18-T Simple Vector载体中,构建克隆载体pMD-E9/F11。克隆的基因片段长度分别为750bp、1917bp,编码250、639个氨基酸。与不同基因型部分代表株氨基酸序列比对分析发现,同源性均很高。用DNAStar Protean分析,IMT5155毒力基因片断E9、F11与其它株相应片断抗原性预测结果基本一致。2.对克隆载体pMD-E9进行双酶切,将得到的750bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a中,然后将重组质粒转化进宿主菌BL21（DE3）中,在37℃1.0 mM IPTG诱导下该片段获得良好表达。经SDS-PAGE鉴定,其表达的融合蛋白约为32.2kD,与预期值一致。Westem blot分析显示,该表达蛋白能与IMT5155全菌制备的兔抗血清发生特异性反应,表明其具有一定的免疫反应性。3.用蛋白纯化试剂盒HisTrapTM HP纯化表达蛋白后得到单一的目的蛋白约32.2kDa,与预期值一致。将上述纯化的蛋白免疫新西兰兔,获得免疫血清,经方阵滴定试验后间接ELISA检测,该抗血清的效价为1:6400。进一步分析重组蛋白的相关生物学功能,分别进行了细胞毒性试验、动物试验、细胞黏附与黏附抑制试验。结果表明,该蛋白没有细胞毒性,对小鼠亦无毒性,有一定的黏附作用。4.将纯化的重组蛋白和全菌用ISA206乳化制成疫苗免疫雏鸡,二免后一周,用试验菌株IMT5155气囊注射攻毒,同时设立非免疫鸡只攻毒对照和非免疫非攻毒对照。攻毒1日后,非免疫攻毒组死亡率为90%,重组蛋白免疫组死亡率为60%,而全菌免疫的死亡率达80%。所有试验组鸡群剖解,从肝和心等部位观察机体的病理变化,免疫攻毒的两组鸡群在肝脏和心包的病变比未免疫鸡显著轻微,全菌免疫组比重组蛋白免疫组症状明显,说明重组蛋白具有一定的免疫保护作用。