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【研究背景】
鼻咽癌(nasopharyngeal carcinomas ，NPC)是我国常见的头颈部肿瘤，近年来由于放疗技术的进步，局控率已明显提高，然而远处转移率仍较高，成为治疗失败的主要原因，因此寻找预测鼻咽癌患者临床预后及转移的新型生物标志物尤为重要。一些研究表明SRSF7(也称剪接因子9G8)在多种肿瘤中表达上调，参与肿瘤的发生发展并与肿瘤患者的预后密切相关。我们前期从公共数据库中分析发现SRSF7在一些头颈部肿瘤中存在明显高表达，然而，SRSF7在鼻咽癌中的表达情况及其在鼻咽癌中发生发展过程中的作用和地位仍不清楚。
【研究目的】
研究SRSF7在鼻咽癌中的表达情况，并进一步分析SRSF7表达与鼻咽癌侵袭转移和预后的相关性，为鼻咽癌患者预测潜在不良预后和寻找新的治疗生物标记物。
【研究方法】
第一阶段：
回顾性选取2012年1月至2014年12月于我院初诊的鼻咽癌患者的存档蜡块标本27例，其中5年无复发转移的8例，根治性放化疗后复发的11例，根治性放化疗后转移的8例；以及2012年1月至2014年12月于我院行鼻咽部活检病理提示慢性炎症病人8例。用免疫组化SP法检测SRSF7在各标本中的表达情况，运用Image-ProPlus6.0图像分析系统检测每张照片中阳性反应区域的平均光密度值(MOD=SumIOD/SumArea)，取每个标本所有视野平均值作为该例标本SRSF7表达的相对含量；分析SRSF7在鼻咽癌和鼻咽炎性组织中表达的特点。
第二阶段:
扩大样本量，在含130例鼻咽癌组织的组织芯片上应用免疫组化SP法检测各标本中的表达情况，Image-ProPlus6.0图像分析系统分析图片，结合患者临床病理资料，分析SRSF7表达与鼻咽癌患者各临床病理参数间的关系；结合患者随访资料，分析SRSF7表达与患者预后的关系。
【结果】
第一部分：
(1)免疫组化结果显示SRSF7在鼻咽慢性炎症及鼻咽癌组织中表达无差
异，鼻咽癌组织中SRSF7表达MOD值为0.0074±0.0072，鼻咽炎性炎症组织中SRSF7表达MOD值为0.0161±0.0134，两者无统计学意义(t=-1.729，P=0.095)。
(2)SRSF7在鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎症组织中表达主要位于细胞核。
(3)鼻咽癌5年无瘤生存患者中SRSF7表达MOD值为0.0074±0.0073，鼻咽癌复发患者SRSF7表达MOD值为0.0161±0.0134；鼻咽癌转移患者中SRSF7表达MOD值为0.0183±0.0086；鼻咽炎性黏膜组中SRSF7表达MOD值为0.0126±0.0089。四组之间MOD均值具有统计学差异，P=0.036；且鼻咽癌五年无瘤生存组与鼻咽癌转移组MOD均值存在差异，鼻咽癌转移组MOD值大于鼻咽癌五年无瘤生存组，即SRSF7在鼻咽癌转移组的表达比鼻咽癌五年无瘤生存组的表达高，具有统计学意义。
第二部分：
(1)在鼻咽癌患者中，男性和女性患者中SRSF7表达的MOD值分别为0.0069±0.0059及0.0059±0.0045；以中位年龄47岁为界，SRSF7在≤47岁及＞47岁的患者中表达MOD值分别为0.0073±0.0053和0.0061±0.0057；在初诊时有无颈部淋巴结转移患者中的MOD值分别为0.0068±0.0054及0.0066±0.0059。经t检验分析，SRSF7表达与患者发病年龄、性别及初诊时有无颈部淋巴结转移均不相关(P＞0.05)。
(2)SRSF7在鼻咽癌中的表达在临床分期I、II、III、IV四组间分布不存在差异，MOD值分别为0.0063±0.0043、0.0064±0.0057、0.0052±0.0005、0.0064±0.0007，p=0.747，四者之间差异无统计学意义。
(3)随访至2017年3月，随访时间43-86月。随访结果提示全组患者总生存率为84.6%，其中1年、3年、5年总生存率分别为100%、98.4%及93.8%；全组患者5年无瘤生存率为54.6%，130例随访患者中45例局部复发，局部复发率34.6%，13例为远处转移，远处转移率10%。
(4)以130例随访患者鼻咽癌组织中SRSF7表达MOD值的四分位数(0.0022651275)为界，将随访患者分为SRSF7高表达组(MOD＞0.0022651275)和SRSF7低表达组(MOD≤0.0022651275)。随访期间96例SRSF7高表达组患者中37例发生局部复发，8例发生远处转移，局部复发率为38.5％，远处转移率8.3%；34例SRSF7低表达组患者中11例发生局部复发，远处转移2例，局部复发率为32.3％，远处转移率5.8%。经过χ2检验分析，SRSF7与鼻咽癌局部复发及远处转移差异均无统计学意义(χ2=0.795,P=0.672)。
(5)SRSF7高表达组随访期内无瘤生存率为49.5%，SRSF7低表达组随访期内无瘤生存率为62.9%，采用Kaplan-Meier法进行单因素生存分析，差异性检验采用log-rank法，结果提示两者差异无统计学意义(χ2=1.844，P=0.175)；SRSF7高表达组随访期内总生存率为84.2%，SRSF7低表达组随访期内总生存率为85.7%，两者之间差异无统计学意义(χ2=0.192，P=0.661)。
(6)采用Cox风险回归模型分析SRSF7表达情况(以MOD值的四分位数为界，将随访患者分为SRSF7高表达组和SRSF7低表达组)、患者年龄、性别、临床分期(I、II、III、IV)、预后(无瘤生存、复发、转移)、初诊时有无颈部淋巴结转移等共6项因素对NPC患者总生存时间的影响。经模型系数检验模型整体有意义(P＜0.001)，其中临床分期变量有统计学意义，p<0.05。临床分期(I、II、III、IVa)的风险比为4.871，与死亡发生成正相关。而SRSF7表达情况并非影响患者预后的独立因素(P=0.197)。
【结论】
本实验通过研究SRSF7在鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎症组织表达的情况，观察到：
(1)运用免疫组化法分析我院病理切片，发现SRSF7的表达在鼻咽慢性炎症组及鼻咽癌组中无差异；鼻咽癌转移组中SRSF7表达水平高于无瘤生存组，具有统计学差异，推测SRSF7表达水平可能与鼻咽癌的转移相关。
(2)130例鼻咽癌组织芯片中SRSF7的表达水平高低与鼻咽癌病人的预后无影响。但SRSF7高表达的鼻咽癌患者可能存在更差的预后。
鼻咽癌(nasopharyngeal carcinomas ，NPC)是我国常见的头颈部肿瘤，近年来由于放疗技术的进步，局控率已明显提高，然而远处转移率仍较高，成为治疗失败的主要原因，因此寻找预测鼻咽癌患者临床预后及转移的新型生物标志物尤为重要。一些研究表明SRSF7(也称剪接因子9G8)在多种肿瘤中表达上调，参与肿瘤的发生发展并与肿瘤患者的预后密切相关。我们前期从公共数据库中分析发现SRSF7在一些头颈部肿瘤中存在明显高表达，然而，SRSF7在鼻咽癌中的表达情况及其在鼻咽癌中发生发展过程中的作用和地位仍不清楚。
【研究目的】
研究SRSF7在鼻咽癌中的表达情况，并进一步分析SRSF7表达与鼻咽癌侵袭转移和预后的相关性，为鼻咽癌患者预测潜在不良预后和寻找新的治疗生物标记物。
【研究方法】
第一阶段：
回顾性选取2012年1月至2014年12月于我院初诊的鼻咽癌患者的存档蜡块标本27例，其中5年无复发转移的8例，根治性放化疗后复发的11例，根治性放化疗后转移的8例；以及2012年1月至2014年12月于我院行鼻咽部活检病理提示慢性炎症病人8例。用免疫组化SP法检测SRSF7在各标本中的表达情况，运用Image-ProPlus6.0图像分析系统检测每张照片中阳性反应区域的平均光密度值(MOD=SumIOD/SumArea)，取每个标本所有视野平均值作为该例标本SRSF7表达的相对含量；分析SRSF7在鼻咽癌和鼻咽炎性组织中表达的特点。
第二阶段:
扩大样本量，在含130例鼻咽癌组织的组织芯片上应用免疫组化SP法检测各标本中的表达情况，Image-ProPlus6.0图像分析系统分析图片，结合患者临床病理资料，分析SRSF7表达与鼻咽癌患者各临床病理参数间的关系；结合患者随访资料，分析SRSF7表达与患者预后的关系。
【结果】
第一部分：
(1)免疫组化结果显示SRSF7在鼻咽慢性炎症及鼻咽癌组织中表达无差
异，鼻咽癌组织中SRSF7表达MOD值为0.0074±0.0072，鼻咽炎性炎症组织中SRSF7表达MOD值为0.0161±0.0134，两者无统计学意义(t=-1.729，P=0.095)。
(2)SRSF7在鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎症组织中表达主要位于细胞核。
(3)鼻咽癌5年无瘤生存患者中SRSF7表达MOD值为0.0074±0.0073，鼻咽癌复发患者SRSF7表达MOD值为0.0161±0.0134；鼻咽癌转移患者中SRSF7表达MOD值为0.0183±0.0086；鼻咽炎性黏膜组中SRSF7表达MOD值为0.0126±0.0089。四组之间MOD均值具有统计学差异，P=0.036；且鼻咽癌五年无瘤生存组与鼻咽癌转移组MOD均值存在差异，鼻咽癌转移组MOD值大于鼻咽癌五年无瘤生存组，即SRSF7在鼻咽癌转移组的表达比鼻咽癌五年无瘤生存组的表达高，具有统计学意义。
第二部分：
(1)在鼻咽癌患者中，男性和女性患者中SRSF7表达的MOD值分别为0.0069±0.0059及0.0059±0.0045；以中位年龄47岁为界，SRSF7在≤47岁及＞47岁的患者中表达MOD值分别为0.0073±0.0053和0.0061±0.0057；在初诊时有无颈部淋巴结转移患者中的MOD值分别为0.0068±0.0054及0.0066±0.0059。经t检验分析，SRSF7表达与患者发病年龄、性别及初诊时有无颈部淋巴结转移均不相关(P＞0.05)。
(2)SRSF7在鼻咽癌中的表达在临床分期I、II、III、IV四组间分布不存在差异，MOD值分别为0.0063±0.0043、0.0064±0.0057、0.0052±0.0005、0.0064±0.0007，p=0.747，四者之间差异无统计学意义。
(3)随访至2017年3月，随访时间43-86月。随访结果提示全组患者总生存率为84.6%，其中1年、3年、5年总生存率分别为100%、98.4%及93.8%；全组患者5年无瘤生存率为54.6%，130例随访患者中45例局部复发，局部复发率34.6%，13例为远处转移，远处转移率10%。
(4)以130例随访患者鼻咽癌组织中SRSF7表达MOD值的四分位数(0.0022651275)为界，将随访患者分为SRSF7高表达组(MOD＞0.0022651275)和SRSF7低表达组(MOD≤0.0022651275)。随访期间96例SRSF7高表达组患者中37例发生局部复发，8例发生远处转移，局部复发率为38.5％，远处转移率8.3%；34例SRSF7低表达组患者中11例发生局部复发，远处转移2例，局部复发率为32.3％，远处转移率5.8%。经过χ2检验分析，SRSF7与鼻咽癌局部复发及远处转移差异均无统计学意义(χ2=0.795,P=0.672)。
(5)SRSF7高表达组随访期内无瘤生存率为49.5%，SRSF7低表达组随访期内无瘤生存率为62.9%，采用Kaplan-Meier法进行单因素生存分析，差异性检验采用log-rank法，结果提示两者差异无统计学意义(χ2=1.844，P=0.175)；SRSF7高表达组随访期内总生存率为84.2%，SRSF7低表达组随访期内总生存率为85.7%，两者之间差异无统计学意义(χ2=0.192，P=0.661)。
(6)采用Cox风险回归模型分析SRSF7表达情况(以MOD值的四分位数为界，将随访患者分为SRSF7高表达组和SRSF7低表达组)、患者年龄、性别、临床分期(I、II、III、IV)、预后(无瘤生存、复发、转移)、初诊时有无颈部淋巴结转移等共6项因素对NPC患者总生存时间的影响。经模型系数检验模型整体有意义(P＜0.001)，其中临床分期变量有统计学意义，p<0.05。临床分期(I、II、III、IVa)的风险比为4.871，与死亡发生成正相关。而SRSF7表达情况并非影响患者预后的独立因素(P=0.197)。
【结论】
本实验通过研究SRSF7在鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎症组织表达的情况，观察到：
(1)运用免疫组化法分析我院病理切片，发现SRSF7的表达在鼻咽慢性炎症组及鼻咽癌组中无差异；鼻咽癌转移组中SRSF7表达水平高于无瘤生存组，具有统计学差异，推测SRSF7表达水平可能与鼻咽癌的转移相关。
(2)130例鼻咽癌组织芯片中SRSF7的表达水平高低与鼻咽癌病人的预后无影响。但SRSF7高表达的鼻咽癌患者可能存在更差的预后。