郁金香(Tulipa gesneriana L.)是世界著名切花之一,也广泛应用于花坛、庭院和室内绿化中,深受各国人民的喜爱。但是郁金香花期不长,延长其花期对延长观赏期和调节流通有重要作用。如何延长花朵的寿命已成为近年来专家们研究的主要课题之本研究通过克隆郁金香ACC氧化酶(ACO)基因片段,将其构建成带内含子的发卡结构的RNAi植物表达载体,以求引起郁金香ACC氧化酶基因的沉默,通过这种调控郁金香中乙烯表达的方法来控制花朵的衰老,从而延长郁金香的花期,并建立起RNAi技术平台。主要进行以下三个方面的研究：1、ACO基因片段的克隆及其植物RNAi表达载体的构建根据郁金香ACO基因序列,设计一对特异引物,以郁金香品种‘Los Angeles’的花瓣cDNA为模板,扩增出郁金香ACO基因片段,将其连接到Pucm-T载体上,对序列测定结果进行分析显示ACO基因片段克隆成功。将ACO基因片段切下先后通过反向和正向分别连接到中间载体pBSin的内含子两端,构成了ACO基因的带内含子的发卡结构(ihp结构)；再将发卡结构连接到二元载体pCAMBIA35S-1301上,经酶切检测及测序分析,成功地构建了含ACO基因发卡结构的植物表达载体。2、郁金香组织培养的试验研究以郁金香的鳞片、花茎、花托、花瓣、花药和雌蕊为外植体,进行了系统地组织培养研究,结果发现,郁金香可以有直接器官发生和间接器官发生两种途径形成再生植株。通过研究,筛选出了适宜的培养基激素配比,成功地获得了郁金香组织培养再生植株。初代培养阶段,以郁金香花茎、花托和雌蕊为最佳外植体选择,污染率在8.6%以下,愈伤组织的诱导率高达72%-100%。适合郁金香的花茎、花托和雌蕊等外植体愈伤组织的诱导和增殖培养的培养基是MS+0.5 mg·L-1 2,4-D,适合这些外植体不定芽的诱导和愈伤组织分化的培养基是MS+0.2 mg·L-12,4-D+6.0 mg·L-1ZT。生根阶段,最适培养基为1/2 MS+1.0 mg·L-1 NAA+2.0 g·L-1A.C。3、含ACO基因片段的RNAi表达载体的遗传转化采用冻融法将RNAi表达载体导入了农杆菌GV3101菌株,对郁金香组培苗和愈伤组织初步进行了含ACO基因片段的RNAi表达载体的遗传转化。