【摘 要】
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谷氨酸脱氢酶(GDH)在神经疾病、肿瘤代谢和高胰岛素血症-高氨血症综合症(HHS)中发挥重要作用。然而,现被发现的谷氨酸脱氢酶抑制剂却很少。本文成功克隆表达人源谷氨酸脱氢酶
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谷氨酸脱氢酶(GDH)在神经疾病、肿瘤代谢和高胰岛素血症-高氨血症综合症(HHS)中发挥重要作用。然而,现被发现的谷氨酸脱氢酶抑制剂却很少。本文成功克隆表达人源谷氨酸脱氢酶,由此进一步筛选出有效的谷氨酸脱氢酶抑制剂依布硒啉,依布硒啉对人源及大肠杆菌来源谷氨酸脱氢酶均有很好的抑制作用。在此基础上,验证了依布硒啉的抗肿瘤活性,发现依布硒啉对A549以及H22细胞株生长均有较好抑制作用。随后研究了化合物依布硒啉抑制人源以及大肠杆菌来源谷氨酸脱氢酶活性的机制。利用实验室合成的生物素标记依布硒啉衍生物进行了分子相互作用分析,随后利用实验室合成的荧光素标记依布硒啉衍生物进行了胶迁移实验,发现依布硒啉与人源谷氨酸脱氢酶活性位点可逆结合,而与大肠杆菌来源谷氨酸脱氢酶共价结合。蛋白组学分析证实依布硒啉可以与大肠杆菌来源谷氨酸脱氢酶活性位点附近的氨基酸残基结合,推测具体结合位点可能为该片段上与NADP~+十分接近的半胱氨酸残基,此推测与酶的点突变实验结果一致。
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