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Ⅰ 水稻叶色突变(叶绿素突变)在水稻中占有很大的比例。根据叶色的的突变表型可将叶色突变体分为白化,黄化,浅绿,白翠,绿白,黄绿和条纹等8种类型。另外根据突变是否会导致死亡,可将叶色突变体分为致死型和非致死型。在非致死型突变体中主要有花斑叶突变体,部分程度失绿突变体和受温度与发育调控的叶色突变体。本研究中所研究的材料259就是一份受温度和发育进程共同控制的叶色突变体。经观察该突变体的白化表型出现在苗期(三叶期前),平均气温低于24℃的条件下。水稻苗期低温白化突变是水稻在发育早期对低温胁迫的一种适应性。 本研究利用便携式叶绿素测量仪测定了突变体在白化时期,复绿后植株的叶绿素含量,并用同为籼稻的9311作为对照。结果发现突变体在白化时的叶绿素含量低平均含量仅为1.2(SPAD)。而当突变体恢复正常后其叶绿素含量(23.6)接近对照9311的水平(25.3)。说明突变体的突变表型不会对植株的后期生长产生太大的影响。 用透射电镜观察突变体的叶绿体在不同表型下的结构变化,9311作为对照。结果发现突变体在白化时的叶绿体不能正常发育仅有囊泡状结构。而复绿后其叶绿体的结构也将恢复正常,与9311的正常叶绿体结构一致。由此进一步从微观结构上说明在白化时期,突变体的叶绿体结构发生了改变。 通过与9311,花B,太粳588和台湾香糯等不同遗传背景的材料做正反交实验。并观察后代的表现,经观察各个组合F1代的苗期在低温情况下均表现正常,而F2代的苗期在同样的环境条件下则会发生白化苗与正常绿苗的分离,经x2检验均符合3:1的分离比例,正常绿苗对白化苗显性,符合孟德尔的单基因遗传。说明该突变体受一个隐性核基因控制,暂将该基因命名为al-12。另外利用SSR分子标记技术将该基因定位在第8染色体上,两侧最近的SSR标记RM5068和RM3702分别距基因0.5-1.1cM和4.9cM。 根据基因定位的结果,在距目的基因两侧最近的SSR标记RM3702和RM5068之间的所有contigs中寻找与突变表型(低温,白化)极其相关的CDS序列最后找到了两个候选序列:细胞色素P450推测序列(putative cytochromosome P450,CYP)和冷激蛋白推测序列(putative cold shock protein,CSP)。根据这两个序列设计了三对引物,以白化突变体和9311在二叶期的叶片总RNA逆转录产物为模板,分别进行PCR扩增。其中出现了在突变体259和对照9311间有表达